[发明专利]用来同时检测四种无浆体的四重PCR专用引物组合及四重PCR检测方法

摘要

本发明公开了一种同时检测四种无浆体的多重PCR专用引物和四重PCR检测方法，牛无浆体专用引物扩增产物大小为529 bp，山羊无浆体专用引物扩增产物大小为874 bp，绵羊无浆体专用引物扩增产物大小为347 bp，嗜吞噬细胞无浆体专用引物扩增产物大小为172 bp。四重PCR反应体系为：LA Taq DNA Polymeras 0.25μL，10×LA Buffer 2.5μL，dNTP Mixture 4.0μL，四个引物对各0.4μL，DNA模板2.0μL，灭菌去离子水补足至25μL；四重PCR反应条件为：94℃预变性5 min，94℃变性30 s，63℃退火30s，72℃延伸1 min，运行40个循环，72℃延伸10 min；该方法有着检测速度快，敏感性高，特异性强、高效、低成本等优点，适于四种病原所引起疾病的流行病学调查和临床确诊。

主权项

1.用来同时检测四种无浆体的四重PCR专用引物组合，其特征在于：引物的核苷酸序列为：山羊无浆体groEL基因位点专用引物序列：Acgroelf：5’‑TGAAGAGCATCAAACCCGAAG‑3’Acgroelr：5’‑CTGCTCGTGATGCTATCGG‑3’；牛无浆体groEL基因位点专用引物序列：Abgroelf：5’‑GTGGGATGTACTGCTGGACC‑3’Abgroelr：5’‑ATGGGGAGAGATATCCGCGA‑3’；绵羊无浆体msp4基因位点专用引物序列：Aomsp4f：5’‑TGAAGGGAGCGGGGTCATGGG‑3’Aomsp4r：5’‑GAGTAATTGCAGCCAGGCACTCT‑3’；嗜吞噬细胞无浆体16S rRNA基因位点专用引物：Ap16sf：5’‑AGTGCTGAATGTGGGGATAATTTATCTCCGTG‑3’Ap16sr：5’‑CTAATCTCCATGTCAAGGAGTGGTAAGGTT‑3’。