[发明专利]一种茶树蔗糖合酶CsSUS2、制备方法及应用在审
| 申请号： | 201910313826.6 | 申请日： | 2019-04-18 |
| 公开（公告）号： | CN110004123A | 公开（公告）日： | 2019-07-12 |
| 发明（设计）人： | 宋传奎;许淼晶;张娜;荆婷婷;赵明月;靳洁阳 | 申请（专利权）人： | 安徽农业大学 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12P19/44 |
| 代理公司： | 西安铭泽知识产权代理事务所(普通合伙) 61223 | 代理人： | 俞晓明 |
| 地址： | 230036 安徽*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明属于分子生物技术领域，特别涉及一种茶树蔗糖合酶CsSUS2、制备方法及应用，包括以茶树cDNA为模板，设计引物，PCR扩增目的基因；构建连接体系反应得表达载体；将构建载体转化至感受态细胞中并扩大培养；茶树蔗糖合酶的分离纯化。本发明从制备的蔗糖合酶CsSUS2纯度高，能促进UDP‑Glucose的原位再生，提高苯乙醇糖苷的合成效率。 | ||
| 搜索关键词： | 蔗糖合酶 茶树 制备 构建 糖苷 分子生物技术 感受态细胞 表达载体 分离纯化 扩大培养 目的基因 设计引物 原位再生 载体转化 苯乙醇 应用 合成 | ||
【主权项】：
1.一种茶树蔗糖合酶CsSUS2的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：目的基因克隆：以茶树cDNA为模板，设计引物，然后进行PCR反应；其中，引物序列：SalI：5’‑gatatcggatccgaattcgagctccgtcgacgcatggggagaaggttgatgaaacccca‑3’，Notl：5’‑gtggtggtggtggtggtgctcgagtgcggccgcttaggaaacatgcctggccgtaggttctg‑3’；PCR反应体系：500ng/μL的茶树cDNA模板2μL，10μM的上、下游引物各2μL，高保真聚合酶24μL，ddH2O添至50μL；构建表达载体：构建连接体系，置于37℃水浴25‑30min再冰浴5min；其中，连接体系为：5×CEⅡBuffer取2μL，pET‑32a+取3μL，PCR产物2μL，ExnaseⅡ试剂1μL，ddH2O添至10μL；转化：将构建载体转化至感受态细胞中，扩大培养得含CsSUS2基因全长的工程菌；茶树蔗糖合酶的分离纯化：离心取沉淀，－80℃下放置2‑4h；加入1×washbuffer，超声破碎后离心得沉淀；沉淀加水混匀后过纯化柱，得茶树蔗糖合酶CsSUS2。
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