[发明专利]快速检测葡萄球菌MecA的试剂盒及方法

摘要

本发明公开了一种快速检测葡萄球菌MecA的试剂盒及方法。该试剂盒，包括细胞裂解液、扩增反应液、胶体金检测液和免疫层析试剂条，其特征在于：其中MecA的转录产物和16S rRNA由扩增反应液中的引物对经NASBA扩增获得。该快速检测葡萄球菌MecA基因的试剂盒检测结果稳定，准确率、灵敏度高，成本低，用时短，适合临床推广。该检测方法适用于临床上快速检测耐甲氧西林的葡萄球菌和鼻咽部葡萄球菌的筛查，快速精准，设备简单，对操作人员要求低，具有作为床旁检测和在各级医院应用的潜力。

主权项

1.一种快速检测葡萄球菌MecA的试剂盒，包括细胞裂解液、扩增反应液、胶体金检测液和免疫层析试剂条，其特征在于：其中MecA的转录产物和16SrRNA由扩增反应液中的引物对经NASBA扩增获得：RNA_MecA扩增引物：MecA‑F1，TCTATTAACTGATGGTATGCMecA‑T7‑R，AATTCTAATACGACTCACTATAGGGAGAGGAGCCATTCCTTTATCTTGTA；16S rRNA扩增引物：SP‑16S‑F1，GCTTGCTTCTCTGATGTTAG；SP‑16S‑R，AATTCTAATACGACTCACTATAGGGAGAGGGCAGCGCGGATCCATCTATA；得到的扩增产物通过与下述胶体金检测液中的探针对结合来检测NASBA扩增产物：MecA的CES系列探针：MecA‑CES1，AACAAGTCGTAAATAAAACACATAA‑ACGGACACTACGAGTTTGGGTCMecA‑CES2，AGAAGATATTTATAGATCTTATGCA‑ACGGACACTACGAGTTTGGGTC；MecA的LES系列探针：MecA‑LES1，AATCCCGTGTTCCCGTAGCACG‑AACTTAATTGGCAAATCCGGTACTG‑GCCTCAAAGACGGACGCCTTCTMecA‑LES2，AATCCCGTGTTCCCGTAGCACG‑CAGAACTCAAAATGAAACAAGGAGAT‑GCCTCAAAGACGGACGCCTTCTMecA‑LES3，AATCCCGTGTTCCCGTAGCACG‑AACTGGCAGACAAATTGGGTGGTTT‑GCCTCAAAGACGGACGCCTTCT；16S rRNA的CES系列探针：SP‑16S‑CES1，CGGCGGACGGGTGAGTAA‑ATCGACCTAGCAATAGCGTACTSP‑16S‑CES2，CACGTGGATAACCTACCT‑ATCGACCTAGCAATAGCGTACT；16S rRNA的LES系列探针：SP‑16S‑LES1，AATCCCGTGTTCCCGTAGCACG‑ATAAGACTGGGATAACTT‑GCCTCAAAGACGGACGCCTSP‑16S‑LES2，AATCCCGTGTTCCCGTAGCACG‑CGGGAAACCGGAGCTAAT‑GCCTCAAAGACGGACGCCTSP‑16S‑LES3，AATCCCGTGTTCCCGTAGCACG‑ACCGGATAATATTTTGAA‑GCCTCAAAGACGGACGCCT；所述免疫层析试剂条包被下述探针检测NASBA扩增产物：M线捕获探针，GACCCAAACTCGTAGTGTCCGT‑GACCCAAACTCGTAGTGTCCGT；16s线捕获探针，AGTACGCTATTGCTAGGTCGAT‑AGTACGCTATTGCTAGGTCGAT；C线捕获探针，CGTGCTACGGGAACACGGGATT‑CGTGCTACGGGAACACGGGATT。