[发明专利]鼠肉与山羊肉、绵羊肉多重PCR检测试剂盒及鉴定方法

摘要

本发明涉及食品检测技术领域，是一种鼠肉、山羊肉与绵羊肉多重PCR检测试剂盒，其特点是，它包含：动物组织线粒体DNA提取体系和三种多重PCR反应体系(阳性对照反应体系、阴性对照反应体系和鉴定反应体系)。PCR反应总体系为50μL，其中含有反应缓冲液5μL，dNTP 2‑5μL，MgCl₂3μL，Taq DNA聚合酶1‑5μL，每种引物0.5‑2μL，待检样本DNA 1‑3μL，余为双蒸馏水。鼠肉、山羊肉与绵羊肉多重PCR鉴定方法是利用细胞色素b具有的种属特异性设计三种特异寡核苷酸引物、确定反应程序和结果判定等步骤，能够同时区别鼠肉、山羊肉及绵羊肉的特异性；具有简便、快速、检测结果可靠等优点。

主权项

1.一种鼠肉、山羊肉与绵羊肉多重PCR检测试剂盒，其特征是，它包含：(1)线粒体DNA提取体系P1溶液30mL，P2溶液30mL，P3溶液10mL,P4溶液30mL，P5溶液30mL，P6溶液50mL；(2)鼠肉、山羊肉、绵羊肉阳性对照品紫外灯下切下鼠肉、山羊肉、绵羊肉特异性DNA片段，进行凝胶回收；测定其浓度，转化大肠杆菌后涂板过夜培养；蓝白筛选后转入LB液体培养基于37℃恒温气浴振荡器中培养过夜；质粒小提，测定其DNA浓度。选取浓度超过100ng/μL的样本交由生工生物工程(上海)股份有限公司测序分析。分析测序结果，并将提取的质粒经PCR鉴定后稀释一定浓度作为试剂盒的阳性对照品。(3)多重PCR反应体系鉴定反应体系(3管)800μL；阳性对照反应体系(3管)，鼠肉(C‑鼠阳)、山羊肉(C‑山羊阳)、绵羊肉(C‑绵羊阳)各1管，各50μL；阴性对照反应体系1管，50μL。(a)鉴定反应体系：总体系为50μL，其中含有反应缓冲液(10×)5μL，dNTP(2.5mmol·L^‑1)2‑5μL，MgCl₂(2.5mmol·L^‑1)3μL，Taq DNA聚合酶1‑5μL，引物1、引物2和引物3(10μmol·L^‑1)中的每种0.5‑2μL，待检样本DNA 1‑3μL，余为双蒸馏水；(b)阳性对照反应体系：总体系为50μL，其中含有反应缓冲液(10×)5μL，dNTP(2.5mmol·L^‑1)2‑5μL，MgCl₂(2.5mmol·L^‑1)3μL，Taq DNA聚合酶1‑5μL，引物1、引物2和引物3(10μmol·L^‑1)中的每种0.5‑2μL，鼠肉、山羊肉及绵羊肉DNA(1:1:1)混合物1‑3μL，余为双蒸馏水；(c)阴性对照液：貂肉或狐狸肉DNA按1：1混合1‑3μL。