[发明专利]一种基于量子点构建的网状结构检测microRNA-155的方法

摘要

本发明提出一种基于量子点构建的网状结构检测microRNA‑155的方法，在microRNA‑155存在下，固定在金纳米粒子@SiO2核壳纳米复合物(AuNPs@SiO2)表面的发夹探针可以部分与之杂交。然后，利用外切酶ExoIII可以产生大量的H1‑AuNPs@SiO2。将辅助链A2、H1‑AuNPs@SiO2与A1‑QDs结合，然后用AuNPs@SiO2通过FRET作用猝灭量子点的荧光信号。溶液中含有越多的microRNA‑155，相应的FL信号就越弱。该方法线性响应范围为0.01fM‑1nM，最低检出限为3aM。此外，该方法在实际人血清样品中的特异性较高，回收率在93‑107％之间，具有很大的实际应用前景。

主权项

1.一种基于量子点构建的网状结构检测microRNA‑155的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)制备核酸序列修饰的量子点：将核壳结构的CdSeTe/ZnS量子点表面的羧基活化后置于核酸序列A1的溶液中，孵育15～20h，得到核酸序列A1修饰的量子点，标记为A1‑QDs；所述核酸序列A1为：5’‑GTTGCCATTGAC‑NH₂‑3’；(2)制备核酸序列修饰的AuNPs@SiO₂复合材料：将断裂二硫键后的核酸序列HP的溶液加入AuNPs@SiO₂的分散液中，于35～38℃的黑暗中孵育15～24h，之后采用巯基己醇阻断AuNPs@SiO₂上剩余的活性结合位点，得到核酸序列HP修饰的AuNPs@SiO₂复合材料，标记为HP‑AuNPs@SiO₂；所述核酸序列HP为：5’‑SH‑ACCTCACACTGTTAATGACCCCTATCACGATTAGCATTAA‑3’；(3)对microRNA‑155进行荧光检测：将步骤(2)制备得到的HP‑AuNPs@SiO₂、外切酶ExoⅢ和microRNA‑155于30～40℃中孵育1～2h之后离心、净化得到的沉淀标记为H1‑AuNPs@SiO₂；向H1‑AuNPs@SiO₂中加入步骤(1)制备得到的A1‑QDs和核酸序列A2，于37℃中孵育1～2h，然后记录溶液的荧光强度；所述核酸序列A2为：5’‑CAATGGCAACCATTAACAGT‑3’。