[发明专利]一种以黄梁木嫩芽为外植体的高效组培扩繁方法

摘要

本发明公开了一种以黄梁木嫩芽为外植体的高效组培扩繁方法。本发明是以黄梁木嫩芽为外植体，通过消毒进瓶、愈伤组织诱导、不定芽诱导、继代培养、生根培养和炼苗移栽等过程成功获得黄梁木离体再生植株，建立了黄梁木高效再生体系。本发明所提供的黄梁木高效组培扩繁方法不仅具有简单易行、经济的特点，而且能够保存黄梁木的优良性状，育成的黄梁木组培苗移栽成活率达到98％以上，可以为黄梁木规模化种植提供优质种苗保障，对于进行野外黄梁木优良性状个体资源的保护、优良无性系快速繁殖、大面积推广、促进黄梁木的产业化发展具有重要意义。

主权项

1.一种以黄梁木嫩芽为外植体的高效组培扩繁方法，其特征在于包括如下步骤：/n(1)外植体消毒进瓶：选取黄梁木嫩芽，清洗，采用消毒剂灭菌处理1～5分钟，清洗，剥除芽鳞后放入MS基本培养基培养1～3天；/n(2)愈伤组织诱导：将步骤(1)中培养1～3天后的芽采用消毒剂灭菌1～5分钟，清洗，然后切下芽上的叶片，横向切出1～3个切口，转接入愈伤组织诱导培养基，暗培养1～3天，转移至光照强度为1500～2000lx、温度为25～28℃的条件下每天光照培养10～15小时，每隔一个月更换新培养基，直至形成出现芽点的愈伤组织；/n(3)不定芽诱导：将步骤(2)中获得的出现芽点的愈伤组织转接入芽诱导培养基中，在光照强度为1500～2000lx、温度为25～28℃的条件下每天光照培养10～15小时，每隔一个月更换新培养基，直至形成不定芽；/n(4)继代培养：将步骤(3)中获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于光照强度为2000～2500lx、温度为25～28℃的条件下每天光照培养12～15小时，至形成2～4cm不定芽；/n(5)生根培养：将步骤(4)中获得的2～4cm的不定芽切下并接种到生根培养基上进行生根诱导，25～28℃条件下暗培养3～5天，然后置于光照强度为2000～2500lx、温度为25～28℃的条件下每天培养光照12～15小时，至长出5～8cm的生根试管苗；/n步骤(1)中所述的MS基本培养基为：MS+25g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，pH为5.5；/n步骤(2)中所述的愈伤组织诱导培养基为：MS+3.0mg/L TDZ+0.1mg/L 2,4-D+0.05mg/LNAA+25g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8；/n步骤(3)中所述的芽诱导培养基为：MS+1.5mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+25g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8；/n步骤(4)中所述的增殖培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+25g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8；/n步骤(5)中所述的生根培养基为：MS+0.05mg/L NAA+25g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。/n