[发明专利]一种新的测定核糖体失活蛋白的酶活性的方法

摘要

本发明提供了一种测定核糖体失活蛋白活性的方法，包括如下步骤：(1)取核糖体失活蛋白(RIP)与三磷酸腺苷(ATP)于合适温度和pH下反应；(2)使步骤(1)的产物与偶联酶试剂反应；(3)测定550nm处的光吸收值；所述合适温度为53～62℃；所述合适pH为1～3；所述偶联酶试剂(ECR显色剂)含有催化量的腺苷脱氨酶(ADA)、过氧化物酶(POD)、黄嘌呤氧化酶(XOD)，以及过量的4‑氨基安替比林(4‑AA)和N‑乙基‑N‑(2‑羟基‑3‑磺丙基)‑3‑甲基苯胺钠盐(TOOS)。本发明使用ATP为底物，能使核糖体失活蛋白充分发挥其N‑糖苷酶活性，生成大量游离的腺嘌呤，通过检测腺嘌呤有效实现核糖体失活蛋白，包括I型、II型和III型RIP的酶活测定，具有良好的应用前景。

主权项

1.一种测定核糖体失活蛋白活性的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)核糖体失活蛋白与三磷酸腺苷混合，于53～62℃和pH1～3的条件下反应；(2)步骤(1)的产物与偶联酶试剂混合，发生酶促反应和显色反应，反应温度为35～45℃，反应pH为6.5～7.0；(3)测定550nm处的光吸收值；所述偶联酶试剂含有催化量的腺苷脱氨酶、过氧化物酶和黄嘌呤氧化酶，以及足够量转化(2)中酶促反应产生的所有过氧化氢的4‑氨基安替比林和N‑乙基‑N‑(2‑羟基‑3‑磺丙基)‑3‑甲基苯胺钠盐。