[发明专利]一种快速定性检测四大家鱼鱼肉制品的方法

摘要

本发明公开了一种快速定性检测四大家鱼鱼肉制品的方法，包括如下步骤：1、待测鱼肉样品中DNA的提取；2、设计引物组合物：3、PCR扩增：4、根据特征条带的长度判断待测鱼肉样品的种类。本发明通过对已报到的四大家鱼基因组序列进行比对，筛选青鱼、草鱼、鲢鱼、鳙鱼四大家鱼鉴别基因、设计了4对特异性引物，采用多重PCR方法，运用基因克隆技术和生物信息学技术，建立同时针对青鱼、草鱼、鲢鱼、鳙鱼的准确、快速、高效的多重PCR检测方法。

主权项

1.一种快速定性检测四大家鱼鱼肉制品的方法，其特征在于包括如下步骤：1.1、待测鱼肉样品中DNA的提取；1.2、设计引物组合物：所述的引物组合包括：以青鱼D‑LOOP基因为靶基因设计的一对引物：上游引物D‑LOOP‑F：5’‑TGTAGTAAGAGACCACCAACTGATT‑3’，下游引物D‑LOOP‑R：5’‑CAACCTTGATTTTTATTTGAGCCTG‑3’；以草鱼COI基因为靶基因设计的一对引物：上游引物COI‑F：5’‑TGGGAACCGCTCTAAGCCTTCTCAT‑3’，下游引物COI‑R：5’‑TAATAGTAGGAGGAAAGAAGGGGGT‑3’；以鲢鱼16SrRNA基因为靶基因设计的一对引物：上游引物16SrRNA‑F：5’‑ATTTTTTTACCTGAGTATGGGAGAC‑3，下游引物16SrRNA‑R：5’‑TCACCAGGTTCGGTAGGTCTGTCAC‑3’；以鳙鱼12SrRNA基因为靶基因设计的一对引物：上游引物12SrRNA‑F：5’‑TAGTTGATAAAACCACGGCGTAAAG‑3，下游引物12SrRNA‑R：5’‑TTGTCAGTGCTTTAGTGTTATGTAT‑3’。1.3、进行PCR扩增，将所得的PCR扩增产物用琼脂糖凝胶电泳进行检测，以无PCR扩增产物作为阴性对照；1.4、根据特征条带的长度判断待测鱼肉样品的种类：青鱼D‑LOOP基因扩增片段在298bp处出现特异性条带，草鱼COI基因扩增片段在210bp处出现特异性条带，鲢鱼16SrRNA基因扩增片段在306bp处出现特异性条带，鳙鱼12SrRNA基因扩增片段在639bp处出现特异性条带。