[发明专利]一种荧光菌株E.coli C600及构建方法与应用有效
| 申请号： | 201910355729.3 | 申请日： | 2019-04-29 |
| 公开（公告）号： | CN110066820B | 公开（公告）日： | 2021-03-16 |
| 发明（设计）人： | 孙坚;李龚;何玉张;苗媛媛;杨心怡;廖晓萍;刘雅红 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 黄莹 |
| 地址： | 510642 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种荧光菌株E.coli C600及构建方法与应用。通过构建含有R6k复制子、以两个ISApl1夹着Lux基因簇和亚碲酸盐耐药基因形成的转座单元以及RP4接合转移基因的重组质粒，将所述重组质粒转入其能够复制的宿主菌中得到重组菌株，再将所述的重组菌株与E.coli C600混合培养，即可筛选得到所述的荧光菌株E.coli C600。所述的荧光E.coli C600获得外援DNA的能力不受影响，稳定性强，能够稳定遗传，荧光不会随着细菌传代而丢失，可作为接合实验的受体菌。所述的荧光E.coli C600在质粒接合转移相关领域中能够更高效、直观地鉴别受体菌和接合子，具有良好的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 荧光 菌株 coli c600 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种荧光菌株E.coli C600的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)构建含有R6k复制子、以两个ISApl1夹着Lux基因簇和亚碲酸盐耐药基因形成的转座单元以及RP4接合转移基因的重组质粒；(2)将步骤(1)构建得到的重组质粒转入能提供π蛋白的宿主菌中得到重组菌株，所述的重组质粒能在所述的宿主菌进行复制；(3)将所述的重组菌株与E.coli C600混合后进行培养，得到孵育物；(4)将步骤(3)所述的孵育物涂布在含有亚碲酸钠的LB琼脂培养基中培养，然后对所述的LB琼脂培养基上的菌落的荧光情况进行观察，呈现荧光的菌株即为所述的荧光菌株E.coli C600。
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