[发明专利]一种利用基因重组制备利拉鲁肽中间体多肽的方法在审
| 申请号： | 201910372353.7 | 申请日： | 2019-05-06 |
| 公开（公告）号： | CN110092825A | 公开（公告）日： | 2019-08-06 |
| 发明（设计）人： | 张程杰;李艳琪;朱永真;赵传海;李同金 | 申请（专利权）人： | 山东汉泰生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/605 | 分类号： | C07K14/605;C12N15/70 |
| 代理公司： | 北京权智天下知识产权代理事务所(普通合伙) 11638 | 代理人： | 王新爱 |
| 地址： | 255086*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明专利涉及生物医药领域，是一种利拉鲁肽中间体多肽即Arg34‑GLP‑1(7‑37)的合成方法，包括如下步骤：优化利拉鲁肽中间体基因，并构建其重组表达载体；转化大肠杆菌BL21，发酵并诱导其融合蛋白表达；之后通过超声破碎细胞、亲和纯化、酶切、过亲和层析柱除杂来获得纯度较高的利拉鲁肽中间体。利用基因重组方法避免了化学合成法中繁琐的制备、纯化步骤以及过多的杂质、污染物的产生以及较长的生产周期。与前面的方法相比，简化了生产过程，降低了生产成本和污染物的产生，更利于规模化生产。 | ||
| 搜索关键词： | 利拉鲁肽 利用基因 多肽 制备 污染物 超声破碎细胞 生物医药领域 重组表达载体 大肠杆菌 生产周期 规模化生产 化学合成法 亲和层析柱 亲和纯化 融合蛋白 生产过程 除杂 构建 酶切 生产成本 发酵 诱导 合成 基因 转化 优化 | ||
【主权项】：
1.一种利用基因重组制备利拉鲁肽中间体多肽的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(a)将利拉鲁肽中间体基因进行密码子优化以利于其在大肠杆菌中高效表达，并将其构建到表达载体pET‑41a中，得到重组表达载体pET‑41a‑GST‑DDDDK‑利拉鲁肽中间体，表达出的重组蛋白为GST‑DDDDK‑利拉鲁肽中间体；(b)将步骤(a)中构建好的重组表达载体转化到大肠杆菌BL21，用IPTG诱导其发酵表达重组蛋白，离心收集菌体沉淀，PBS缓冲液重悬后超声破碎细胞，离心获得上清液；(c)将上清液过滤除菌体后，过GST亲和纯化柱吸附重组蛋白GST‑DDDDK‑利拉鲁肽中间体，之后用Tris‑HCl洗脱缓冲液(含10‑40mM还原型谷胱甘肽)洗脱并收集重组蛋白；(d)得到的重组蛋白用重组牛肠激酶(EK)酶切12‑16h；(e)酶切后的混合液调pH，再次过GST柱除去杂蛋白，过柱滤液即为纯度较高的利拉鲁肽中间体。
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