[发明专利]基于HPLC指纹图谱的天然植物抗球虫饲料添加剂的质量检测方法

摘要

本发明提供一种基于HPLC指纹图谱的天然植物抗球虫饲料添加剂的质量检测方法，包括供试品溶液的制备，绿原酸、咖啡酸、橙皮苷3种对照品溶液的制备以及HPLC检测。本发明共标定了18个共有峰，其中指认3个已知峰。本发明首次采用建立HPLC指纹图谱的方法鉴别天然植物抗球虫饲料添加剂产品，该方法建立的天然植物抗球虫饲料添加剂HPLC指纹图谱与对照图谱的相似度均在90％以上，能有效表征其特点，有利于全面监控产品质量。本发明技术含量高，避免了质量控制的单一性和片面性；同时该方法操作简单，重复性好，可信度高，便于药材加工、销售企业和质检单位推广应用。

主权项

1.基于HPLC指纹图谱的天然植物抗球虫饲料添加剂的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)供试品溶液的制备取天然植物抗球虫饲料添加剂样品，用甲醇溶解，超声处理，滤过，收集滤液，将滤液蒸干，向残渣中加入甲醇复溶并用微孔滤膜过滤后，作为供试品溶液；2)3种对照品溶液的制备以甲醇为溶剂，分别配制绿原酸对照品溶液、咖啡酸对照品溶液和橙皮苷对照品溶液，浓度分别为0.5～1.5mg/ml、0.2～0.8mg/ml和0.5～1.5mg/ml；3)HPLC检测色谱条件：AgilentSB‑C18色谱柱，规格4.6mm×250mm，5μm；检测波长322‑375nm；柱温30‑45℃；进样量：5‑15μl；流动相A：乙腈，流动相B：0.1％磷酸溶液，流动相A和流动相B浓度之和为100％，进行梯度洗脱；流速0.5‑1ml·min^‑1；洗脱条件：0‑10min，流动相A：10‑15％，流动相B：90‑85％；10‑20min，流动相A：15‑18％，流动相B：85‑82％；20‑30min，流动相A：18‑20％，流动相B：82‑80％；30‑40min，流动相A：20‑30％，流动相B：80‑70％；40‑45min，流动相A：30‑10％，流动相B：70‑90％；45‑47min，流动相A：10％，流动相B：90％；将供试品溶液注入高效液相色谱仪，得到HPLC指纹图谱；同时分别用3种对照品溶液进样，确定绿原酸、咖啡酸和橙皮苷的出峰位置；测定结果为：共计18个共有峰，其中3、5、11号峰，分别为绿原酸、咖啡酸、橙皮苷，且3号峰为内参照峰，其余15个峰为特征指纹峰；各个峰的相对保留时间分别为3.108、3.988、10.029、10.655、12.672、15.343、18.867、22.379、24.182、28.575、35.540、37.646、38.315、40.767、41.486、41.899、42.551、43.573，平均相对峰面积比分别为2320.555、643.841、9545.936、633.801、4930.843、719.967、1044.565、5439.596、1193.835、812.337、703.755、6692.912、10358.90、8624.709、436.598、833.476、2554.748、7052.612。