[发明专利]一种人胎盘源NK细胞的体外激活扩增方法

摘要

本发明公开了一种人胎盘源NK细胞的体外激活扩增方法，包括在：(1)获取原始NK细胞；(2)利用负载有青蒿素复合液的多孔导电微球与无血清培养液作为培养基；(3)将所述原始NK细胞加入所述培养基中，每天间歇性利用电极通入电流进行激活扩增培养；(4)细胞收集。总之，利用本发明的方法可在体外大规模扩增至1000倍以上、纯度大于98％，并且细胞活性高、杀伤力强的人胎盘源NK细胞。

主权项

1.一种人胎盘源NK细胞的体外激活扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)获取原始NK细胞：将人胎盘进行清洗和除菌，胎盘组织消化，加入细胞分离液并离心，获取单个的原始NK细胞；(2)制备培养基：将多孔导电微球与青蒿素复合液按照质量比为1:2‑4混合，在50‑60℃超声波处理1‑3h，过滤，将负载有青蒿素复合液的多孔导电微球冷冻干燥；加入无血清培养液，在37℃下浸泡24‑36h，更换无血清培养液，得到培养基；(3)激活培养：将所述原始NK细胞加入所述培养基中至NK细胞浓度为3×10⁵‑8×10⁵个/ml，置于37℃、5％CO₂培养箱中培养3‑15天，每隔2天换液一次，并调整细胞密度为4×10⁵‑6×10⁵个/ml，每天间歇性利用电极通入电流进行激活扩增；(4)细胞收集：培养结束后，一次过滤，得到液体部分和固体部分，向所述液体部分加入缓冲液，1000g离心力，离心15min，弃上清液，取第一批NK细胞；向所述固体部分加入洗脱液，反复冲洗，二次过滤，去除固体颗粒部分，1000g离心力，离心15min，弃上清液，取第二批NK细胞；将所述第一批NK细胞和第二批NK细胞混合，完成NK细胞收集。