[发明专利]一种利用人血浆组份II+III生产制备IVIG的方法

摘要

本发明公开了一种以人血浆组份II+III为起始原料，以低温乙醇沉淀结合离子交换柱层析生产制备静注人免疫球蛋白（IVIG）的方法。本发明中层析上样前料液不需要透析脱醇脱盐，也无需调节上样料液电导值，大大简化了工艺流程，使整个工艺具有流程简洁，生产周期短，纯度高的优点。通过本方法生产的IVIG产品所含的IgA和IgM较传统工艺大幅下降，PKA、ACA、抗A抗B血凝素及多聚体比均符合药典规定。

主权项

1.一种利用人血浆组份II+III生产制备IVIG的方法，其特征在于，所述生产制备方法包括以下工艺步骤：（1）组分沉淀的悬浮将冰冻的组份II+III沉淀从冷库取出，切成碎块，然后按一定的质量投料比（组份：缓冲液），投入预先配制的悬浮缓冲液中，并按每kg组份加入0.17kg甘氨酸的比例加入甘氨酸，均匀搅拌4‑18小时，使沉淀充分悬浮分散；（2）乙醇沉淀将步骤（1）得到的悬浮液pH调节到4.95‑5.45，然后按11%‑17%的体积比加入乙醇溶液，料液温度控制在‑5~1℃，搅拌2‑6小时，使杂质蛋白充分溶出，得到均匀的悬浮液；（3）离心或压滤将步骤（2）得到的悬浮液pH调节到4.95‑5.65，在‑5~0℃下离心或压滤；收集上清液，即为粗纯的IgG溶液；（4）阴离子交换柱层析将步骤（3）得到的粗纯IgG溶液经深层滤器加0.45um滤芯过滤后，上阴离子交换柱，控制上样液的线流速不高于100cm/h，柱子预先用平衡缓冲液平衡；上柱过程中，收集流穿液，上柱结束后，用平衡缓冲液冲洗柱子，将冲洗液并入流穿液中；（5）超滤浓缩及调节将步骤（4）得到的流穿液用截留分子量30K的超滤膜浓缩，然后用透析液恒体积透析6‑10倍，然后浓缩至蛋白浓度6‑7%(w/v)左右，转移出超滤膜包并用透析液后洗膜包，再用透析液调蛋白浓度至5.35‑5.45%(w/v)；（6）低PH孵化往步骤（5）得到的蛋白溶液中加入5%的山梨醇(w/w)，并调节pH到4.10‑4.20，用0.22微米的除菌滤芯过滤后置于室温孵化21天；（7）纳米膜除病毒过滤用20纳米的滤芯过滤步骤（6）孵化结束的蛋白溶液以去除病毒；（8）除菌过滤并分装。