[发明专利]一种抗氧化肽的制备方法在审
| 申请号： | 201910385525.4 | 申请日： | 2019-05-09 |
| 公开（公告）号： | CN110218754A | 公开（公告）日： | 2019-09-10 |
| 发明（设计）人： | 董珊珊 | 申请（专利权）人： | 海盐县凌特生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12P21/06 | 分类号： | C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16;C07K1/20;C07K1/14 |
| 代理公司： | 北京国翰知识产权代理事务所(普通合伙) 11696 | 代理人： | 吕彩霞 |
| 地址： | 314300 浙江省嘉兴市海盐县*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明提供一种抗氧化肽的制备方法，属于生物技术领域，包括以下步骤：1)将西番莲果肉与水水磨后加入复合蛋白酶与酶解助剂酶解，灭酶得酶解液；2)将酶解液固液分离，取液相超滤，小于2kDa的滤液低温浓缩得浓缩提取物；3)以水复溶浓缩提取物，所得肽溶液以凝胶层析柱分离纯化，收集洗脱组分的第二峰，液质联用色谱分离鉴定，得到西番莲抗氧化肽粗品；4)西番莲抗氧化肽粗品经二次纯化即得抗氧化肽纯品。有益效果为：本制备方法可缩短50～80％的酶解时间，显著降低酶解成本与能量消耗，抗氧化肽纯品中西番莲抗氧化肽的纯度较高，其对DPPH自由基和羟自由基的清除率可达90％以上，具有较高的经济价值。 | ||
| 搜索关键词： | 抗氧化肽 酶解 制备 浓缩提取物 酶解液 粗品 生物技术领域 复合蛋白酶 凝胶层析柱 二次纯化 分离纯化 固液分离 滤液低温 能量消耗 色谱分离 液质联用 羟自由基 果肉 水磨 清除率 肽溶液 超滤 复溶 灭酶 洗脱 浓缩 | ||
【主权项】：
1.一种抗氧化肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)将西番莲果肉与水混合，水磨磨细后加入复合蛋白酶与酶解助剂酶解，灭酶得酶解液；2)将步骤1)中的酶解液中的固液分离，取液相超滤，将小于2kDa的滤液低温浓缩得浓缩提取物；3)以水复溶步骤2)的浓缩提取物，所得肽溶液以凝胶层析柱分离纯化，收集洗脱组分的第二峰，液质联用色谱分离鉴定，得到西番莲抗氧化肽粗品；4)西番莲抗氧化肽粗品经二次纯化即得抗氧化肽纯品；其中，所述复合酶是重量比为1:0.3～1.5的丝氨酸蛋白酶Carsberg和胰蛋白酶YDB‑CF的混合酶；所述酶解助剂是含有0.1～1wt％戊二醇和0.8wt‰t‑亮氨酸叔丁酯的水溶液。
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