[发明专利]高密度灌注培养重组CHO细胞生产人促卵泡激素的方法、培养基及其应用

摘要

本发明公开了一种高密度培养重组CHO细胞生产人促卵泡激素的方法、培养基及其应用，属于生物制药领域，制备方法包括：将CHO细胞复苏后，使用基础培养基进行细胞密度扩增；当活细胞密度达到一定密度后，使用生产培养基进行灌注培养：新鲜生产培养基补加到生物反应器罐体内，反应器罐体外连接的中空纤维截留装置使CHO细胞被截留，使细胞能够维持很高的密度和活力；当反应器内细胞处于稳定状态时，开启CHO细胞表达产物收集。本发明通过生物反应器搅拌培养和外接细胞截留装置可以截留细胞，过滤碎片和表达的蛋白，为细胞生长提供高密度环境，同时中空纤维柱的反向冲洗，降低了纤维堵塞，延长了细胞的高密度培养时间，显著提升批次产量。

主权项

1.一种高密度灌注培养重组CHO细胞生产人促卵泡激素的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将CHO细胞复苏活化后，使用基础培养基进行培养获得种子悬液；2)当种子培养液达到一定密度后，采用灌注培养基进行灌注培养；灌注培养的方法：将新鲜生产培养基补加到生物反应器罐体内，反应器的外部连接中空纤维截留装置，通过对CHO细胞进行截留和反冲洗维持CHO细胞较高的密度和活力；使用所述的灌注培养基进行灌注和反冲洗；3)当反应器内细胞密度及活力处于稳定状态时，开启CHO细胞表达产物收集,表达产物为人促卵泡激素；其中，所述的灌注培养基为无血清、无蛋白以及化学成份明确的细胞培养基，所述的灌注培养基由基础培养基和补料培养基按照一定比例混合而成，相应的，所述基础培养基也为无血清、无蛋白以及化学成份明确的细胞培养基。