[发明专利]一种香蕉A、B基因组的分型方法

摘要

本发明公开了一种香蕉A、B基因组的分型方法，该方法包括以下步骤：利用PCR‑RFLP标记区分尖叶蕉、长梗蕉基因组，利用IRAP标记确定长梗蕉基因组的个数，结合流式细胞仪测定的倍性结果，确定香蕉种质资源基因型。使用本发明提供的方法不受田间栽培条件和环境影响，取材方便，在香蕉生长任何时期都能进行倍型和基因型准确而快速鉴定。

主权项

1.一种香蕉A、B基因组的分型方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)DNA提取：提取待检测样品的总DNA；(2)尖叶蕉、长梗蕉基因组区分：以待检测样品的总DNA作为模板，利用引物ITS L‑F:5'‑TCGTAACAAGGTTTCCGTA GGTG‑3'/ITS 4‑R:5'‑TCCTCCGCTTATTGATATGC‑3'进行PCR‑RFLP扩增；将扩增产物纯化回收，经AfaI酶酶切后进行琼脂糖凝胶电泳，若酶切后只扩增出一条530bp的特异带，则待检测样品只含尖叶蕉基因组，若酶切后扩增出大小分别为350bp和180bp的特异带，则待检测样品只含长梗蕉基因组，若酶切后扩增出大小分别为530bp、350bp、180bp的特异带，则待检测样品既含尖叶蕉基因组又含长梗蕉基因组；(3)长梗蕉基因组个数确定：以待检测样品的总DNA作为模板，使用单引物Gy LTRev 5'‑CTTAGGCAAAACCAGCTAAGTCCG‑3'进行IRAP扩增，将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，若扩增出大小为350bp的特异带，则待检测样品含有长梗蕉基因组，而只含有尖叶蕉基因组的待检测样品不会显示350bp条带；将含有长梗蕉基因组的待检测样品进行特异性扩增，以含有长梗蕉基因组的待检测样品的总DNA作为模板，使用引物BFor:5'‑AGGGT TCGAAGTATAGG TTCGG‑3'/BRev:5'‑AATGTTTAAGTAGAGGGCAAGACG‑3'进行扩增，将扩增产物纯化回收，经AluI酶酶切后进行琼脂糖凝胶电泳，若酶切后只扩增出一条200bp的特异带，则待检测样品只含有1个长梗蕉基因组，若酶切后扩增出两条200bp的特异带，则待检测样品含有2个长梗蕉基因组，以此确定长梗蕉基因组的个数；(4)香蕉种质资源基因型确定：采用流式细胞仪对香蕉的倍性进行鉴定，结合步骤S2尖叶蕉、长梗蕉基因组的区分结果，以及步骤S3长梗蕉基因组的个数确定结果，确定香蕉种质资源基因型。