[发明专利]血源性女性自体生殖干细胞的制备方法、试剂盒及应用

摘要

本发明涉及血源性女性自体生殖干细胞的制备方法、试剂盒及应用，利用女性自体血液细胞作为原料细胞，通过非转基因的生产血源性女性自体生殖干细胞技术和方法。这种血源性女性自体生殖干细胞的制备方法，包括：将女性自体血液细胞在细胞培养液O1中培养3天；在细胞培养液O2中继续培养6‑9天；然后在细胞培养液O3中继续培养6‑9天；以及收集血源性女性自体生殖干细胞；本发明还提供了一种用于制备血源性女性自体生殖干细胞的试剂盒。使用本发明的方法及试剂盒在血源性女性自体生殖干细胞的取材、生产速度、产量、纯度方面具有显著优势。

主权项

1.一种血源性女性自体生殖干细胞的制备方法，其特征在于，所述方法包括：将人的体细胞在细胞培养液O1中培养3天，所述细胞培养液O1为RPMI1640、并含有: 2‑10%的血清替代品(KSR)；EPO 1‑1000 ng/ml；M‑GSF 1‑1000 ng/ml；G‑GSF 1‑1000 ng/ml；IL‑3 1‑1000 ng/ml；IL‑6 1‑1000 ng/ml；SCF 1‑1000 ng/ml；bFGF 1‑1000 ng/ml；Nanog 1‑1000 ng/ml；Oct4 1‑1000 ng/ml；Sox2 1‑1000 ng/ml；c‑myc 1‑1000 ng/ml；然后换用细胞培养液O2培养6‑9天，所述细胞培养液O2为M2培养液、并含有: 2‑10%的血清替代品(KSR)；Nanog 1‑1000 ng/ml；Oct4 1‑1000 ng/ml；Sox2 1‑1000 ng/ml；myc 1‑1000 ng/ml；DDX4(Mvh) 1‑1000 ng/ml；Dazl 1‑1000 ng/ml；bFGF 1‑1000 ng/ml；EGF 1‑1000 ng/ml；IL‑6 1‑1000 ng/ml；Sox17 1‑1000 ng/ml；VASA 1‑1000 ng/ml；SCF 1‑1000 ng/ml；G‑GSF 1‑1000 ng/ml；再换用细胞培养液O3继续培养6‑9天，所述细胞培养液O3为M16培养液、并含有: 2‑10%的血清替代品(KSR)；RA 1‑1000 uM；DMC1 1‑1000 ng/ml；PRDM1 1‑1000 ng/ml；PGK2 1‑1000 ng/ml；hCG 1‑300iu/ml; 孕酮1‑300iu/ml； 雌二醇 1‑300iu/ml；FSH 1‑1000 ng/ml；DDX4(Mvh) 1‑1000 ng/ml；Dazl 1‑1000 ng/ml；Oct4 1‑1000 ng/ml；Sox17 1‑1000 ng/ml；VASA 1‑1000 ng/ml；bFGF 1‑1000 ng/ml；VASA 1‑1000 ng/ml；GF 2 1‑1000 ng/ml； FGF 7 1‑1000 ng/ml；BMP2 1‑1000 ng/ml；BMP4 1‑1000 ng/ml；IL‑6 1‑1000 ng/ml；NT 4 1‑1000 ng/ml；GDNF 1‑1000 ng/ml；Activin A 1‑1000 ng/ml；UB 1‑1000 ng/ml；17α,20β‑DHP 1‑1000 ng/ml；AY9944‑A‑7 1‑1000 ng/ml；EGF 1‑1000 ng/ml；VEGF 1‑1000 ng/ml；SCF 1‑1000 ng/ml；IGF 1‑1000 ng/ml；IGF I 1‑1000 ng/ml；IGF II 1‑1000 ng/ml；GRF 1‑1000 ng/ml；Ifitm3 1‑1000 ng/ml；GH 1‑1000 ng/ml；地塞米松1‑1000 ng/ml；G‑GSF 1‑1000 ng/ml；获得人血源性自体生殖干细胞；培养条件，在5% CO₂和37℃条件下进行细胞培养。