[发明专利]一种高效生产重组人血清白蛋白的发酵方法

摘要

本发明涉及一种高效生产重组人血清白蛋白的发酵方法，采用巴斯德毕赤酵母菌作为生产菌株，通过对其生长期和诱导期的温度、pH、溶氧水平、甲醇浓度、培养基成分等各方面条件的优化，大幅度提高了宿主细胞目的蛋白重组人血清白蛋白(rHSA)的表达量，同时避免了发酵液中含有过多的酵母细胞碎片，利于下游纯化过程。经过优化，发酵培养基和诱导培养基成分较现有培养基成分简单，可以有效降低经济成本。本发明有效的缩短了诱导期，整个发酵过程仅需要经过92‑116h，便可以获得表达量为25.3g/L的重组人血清白蛋白，相比于现有技术具有更高的生产效率，能够满足庞大的市场需求。

主权项

1.一种高效生产重组人血清白蛋白的发酵方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取rHSA GS115工程菌液，转接于900‑1000倍菌液体积的第一YPD培养基上震荡培养16‑18h，得到一级菌液，将所述一级菌液继续转接于900‑1000倍菌液体积的第二YPD培养基上震荡培养16‑18h，得到种子液备用；(2)向种子液中加入为其体积4‑6倍的发酵培养基中进行发酵，温度为27‑29℃，pH为5.5‑6.0，转速设定为200‑800rpm，溶氧水平保持在19％‑21％，得到发酵液；(3)当溶氧水平大幅上升时，向发酵液中连续流加浓度为8‑12g/L的甘油补料液，得到补料后发酵液；(4)当溶氧水平再次大幅上升时，连续流加甲醇诱导液和辅助诱导剂进行诱导，甲醇的浓度保持在8‑12ml/L，调节pH为5.9‑6.1，温度为20‑23℃，诱导60‑80h后得到诱导后发酵液；(5)将所述诱导后发酵液离心、分装后冷冻保存，即得含有重组人血清白蛋白的发酵液。