[发明专利]一种强效抑藻活性物质的提取方法及其应用

摘要

本发明公开了一种强效抑藻活性物质的提取方法及其应用，将抑藻活性菌株接种于液体LB培养基中，培养至对数生长期；将培养至对数生长期的细菌发酵液离心后得到无菌上清液，向无菌上清液中加入乙酸乙酯并将乙酸乙酯与无菌上清液充分混匀萃取，将乙酸乙酯萃取液旋干后得到强效抑藻活性物质，该强效抑藻活性物质用于抑制铜绿微囊藻细胞生长。本发明所提取的抑藻活性物质及其制得的抑藻制剂均能够高效地抑制有害藻类的生长，对水华等灾害的防治及水生生态系统的平衡有重要意义，该抑藻制剂在工业生产中也有巨大的潜力。

主权项

1.一种强效抑藻活性物质的提取方法，其特征在于具体步骤为：步骤S1：取铜绿微囊藻水华现场的表层样品溶解于高压灭菌的液体LB培养基中，置于150～200rpm的摇床中震荡20～30min使得样品均匀分散；10倍稀释法涂布均匀分散的样品于LB固体平板，于28～37℃培养3～5d；挑取不同类型单菌落划线于LB固体平板，于28～30℃培养3～5d，重复该步骤直至得到纯培养；接种分离出的纯培养物单菌落于4mL的液体LB培养基，置于28～37℃摇床，180～250rpm震荡培养3～5d；将1mL发酵液加入到20mL指数期铜绿微囊藻培养液中，于20±1℃，12h光照，12h黑暗，50μmol photons m^‑2s^‑1光照强度条件下培养2d，观察铜绿微囊藻细胞生长状况，从而筛选出抑藻活性菌株，将抑藻活性菌株于‑80℃保藏，待用；步骤S2：将抑藻活性菌株接种于液体LB培养基中，培养至对数生长期；将培养至对数生长期的细菌发酵液离心后得到无菌上清液，向无菌上清液中加入乙酸乙酯并将乙酸乙酯与无菌上清液充分混匀萃取，将乙酸乙酯萃取液旋干后得到强效抑藻活性物质，该强效抑藻活性物质用于抑制铜绿微囊藻细胞生长；所述液体LB培养基的组成为胰蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L和氯化钠10g/L，pH＝7.2。