[发明专利]能同时表达LMP1和CD30双靶点CAR的质粒、CAR-T细胞、构建方法及其应用有效
申请号: | 201910419725.7 | 申请日: | 2019-05-20 |
公开(公告)号: | CN110172479B | 公开(公告)日: | 2020-09-18 |
发明(设计)人: | 廖兴华;王君;项园;李佳蓬;张慧敏;黄凤;戴周彤;顾潮江;张同存 | 申请(专利权)人: | 武汉科技大学 |
主分类号: | C12N15/867 | 分类号: | C12N15/867;C12N5/10;A61K39/00 |
代理公司: | 武汉红观专利代理事务所(普通合伙) 42247 | 代理人: | 陈凯 |
地址: | 430000 *** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | 本发明属于生物医药技术领域,特别涉及能同时表达LMP1和CD30双靶点CAR的质粒、CAR‑T细胞、构建方法及其应用。该T细胞可同时表达针对霍奇金淋巴癌细胞表面的肿瘤相关抗原LMP1、CD30的抗体Anti‑LMP1、Anti‑30,其技术要点主要包括首先构建能同时表达LMP1和CD30双靶点CAR的质粒,之后对该质粒进行慢病毒包装,并感染T细胞,得到CAR‑T细胞,用该CAR‑T细胞杀灭EB病毒感染的霍奇金淋巴癌细胞。 | ||
搜索关键词: | 同时 表达 lmp1 cd30 双靶点 car 质粒 细胞 构建 方法 及其 应用 | ||
【主权项】:
1.一种能同时表达LMP1和CD30双靶点CAR的质粒的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:S1:依次连接抗CD30的轻链、抗LMP1单链抗体的轻链、抗LMP1单链抗体的重链、抗CD30的重链、CD8α铰链区、CD28跨膜区和胞内区、41BB胞内区、以及CD3ζ胞内区,并合成基因序列片段;S2:将步骤S1中得到的基因序列片段连接至慢病毒表达载体PTK881,得到能同时表达LMP1和CD30双靶点CAR的质粒PTK‑hCD30‑hLMP1。
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