[发明专利]一种测定重组人可溶性gp130-Fc融合蛋白生物学活性的新方法

摘要

本发明涉及一种测定重组人可溶性gp130‑Fc融合蛋白生物学活性的新方法。所述方法利用SIE萤光素酶报告基因质粒，转染CHO‑K1细胞后加压筛选获得稳定表达SIE萤光素酶的单克隆细胞株。利用IL‑6/sIL‑6Rα复合物刺激激活SIE反应元件下游萤光素酶报告基因表达，可溶性gp130‑Fc融合蛋白竞争性结合IL‑6/sIL‑6Rα复合物，剂量依赖性抑制萤光素酶表达，加入萤光素酶底物后，根据测定的化学发光值拟合四参数曲线确定重组人可溶性gp130‑Fc融合蛋白的生物学活性。本发明针对重组人可溶性gp130‑Fc融合蛋白的生物学活性建立了快速准确的检测方法，避免了细胞培养的不确定性所带来的不稳定因素和长时间孵育所带来的细胞污染等可能出现的问题。

主权项

1.一种测定重组人可溶性gp130‑Fc融合蛋白生物学活性的新方法,其特征在于：所述方法利用SIE萤光素酶报告基因质粒，转染CHO‑K1细胞后获得稳定表达SIE萤光素酶报告基因的细胞株，利用IL‑6/sIL‑6α复合物刺激激活SIE反应元件下游萤光素酶报告基因表达，加入sgp130‑Fc后反式信号通路被阻断，抑制萤光素酶报告基因表达；根据测定的萤光信号值拟合四参数曲线确定重组人可溶性gp130‑Fc融合蛋白的生物学活性。