[发明专利]一种高效简便纯化蛋白的方法有效
| 申请号： | 201910426745.7 | 申请日： | 2019-05-22 |
| 公开（公告）号： | CN110714020B | 公开（公告）日： | 2021-08-03 |
| 发明（设计）人： | 陈振娅;霍毅欣;赵璐瑶 | 申请（专利权）人： | 北京理工大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/62;C12N1/21;C07K14/435;C12R1/19 |
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| 地址： | 100081 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 传统的柱层析纯化重组蛋白的工艺生产成本较高，步骤繁琐。基于亲和标签的非色谱纯化方法可降低成本，提高靶蛋白产量，但标签去除成本较高。为解决上述问题，本发明提出了一种仅需离心和裂解步骤的简便、高效的纯化方法。该方法使用了CipA包涵体蛋白和内含肽蛋白(Synechocystis sp.PCC6803 DnaB，Ssp DnaB)，利用CipA的自组装功能和DnaB的在弱酸条件下的自裂解功能来实现蛋白纯化。其中靶蛋白可以是要表达和纯化的任意一种蛋白，且纯化后纯度可达95％以上。此外，本发明还对CipA和DnaB之间的连接肽进行了优化，进一步提高了DnaB的裂解效率，同时降低了CipA对靶蛋白活性的影响。该方法有潜力应用于酶的工业化生产。关键词：蛋白质纯化方法，包涵体蛋白CipA，自断裂蛋白DnaB。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 高效 简便 纯化 蛋白 方法 | ||
【主权项】：
1.一种将包涵体蛋白CipA与靶蛋白通过内含肽DnaB连接，调节pH值可以使内含肽断裂来实现蛋白纯化的方法，该方法在CipA和eGFP之间插入了一段小内含肽(Synechocystissp.PCC6803 DnaB，Ssp DnaB)，以产生CipA-DnaB-eGFP包涵体(CipA-DnaB-eGFP PCIs)。DnaB在低pH条件下可发生自裂解，使CipA与eGFP分离，将裂解后的蛋白混合物离心，eGFP作为唯一的蛋白留在上清液中，而CipA和DnaB则仍留在沉淀物中，最终达到纯化eGFP的目的，为了提高裂解效率，本发明在CipA和DnaB之间插入了不同的连接肽，本发明提出了一种快速、简便的蛋白质纯化方法，可用于低成本快速生产高纯度蛋白质。/n
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