[发明专利]一种Brevinin-2GUb多肽的重组表达方法及应用在审
| 申请号： | 201910427262.9 | 申请日： | 2019-05-22 |
| 公开（公告）号： | CN110205336A | 公开（公告）日： | 2019-09-06 |
| 发明（设计）人： | 王菊芳;林静莲;马毅 | 申请（专利权）人： | 华南理工大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/66;C07K14/46;C07K1/22;A61K38/17;A61K9/08;A61P3/10 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 宫爱鹏 |
| 地址： | 510640 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明属于基因工程和生物制药领域，公开了一种Brevinin‑2GUb多肽的重组表达方法，包括：(1)将Brevinin‑2GUb基因插入到含有硫氧还蛋白、组蛋白标签及肠激酶酶切位点的pET32系列载体中获得重组表达载体；(2)将重组表达载体转化至大肠杆菌获得重组表达工程菌株；(3)将工程菌株进行诱导表达，离心收集菌体、破碎，离心获得上清液，对上清液进行镍离子亲和层析获得融合蛋白；(4)将融合蛋白用肠激酶酶切缓冲液透析，然后用肠激酶对融合蛋白进行切割，再进行镍离子亲和层析后浓缩，获得不带标签的目的多肽。该多肽在低浓度下即可对INS‑1细胞具有显著促胰岛素分泌活性，可用于制备降糖多肽药物。 | ||
| 搜索关键词： | 多肽 融合蛋白 重组表达 肠激酶 镍离子亲和层析 重组表达载体 工程菌株 上清液 离心收集菌体 生物制药领域 大肠杆菌 硫氧还蛋白 酶切缓冲液 胰岛素分泌 组蛋白标签 多肽药物 基因插入 基因工程 酶切位点 诱导表达 降糖 可用 透析 制备 破碎 切割 标签 浓缩 细胞 转化 应用 | ||
【主权项】：
1.一种Brevinin‑2GUb多肽的重组表达方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将Brevinin‑2GUb基因插入到含有硫氧还蛋白、His标签及肠激酶酶切位点的pET32系列载体中，得到重组表达载体；(2)将步骤(1)中得到的重组表达载体转化至大肠杆菌中，得到重组表达工程菌株；(3)将步骤(2)中得到的工程菌株进行诱导表达，离心收集菌体，破碎菌体后再次离心收集上清液，对上清液进行镍离子亲和层析获得融合蛋白；(4)将步骤(3)得到的融合蛋白用肠激酶酶切缓冲液透析，然后用肠激酶对透析后的融合蛋白进行切割，再进行镍离子亲和层析，获得不带标签的高纯度Brevinin‑2GUb多肽。
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