[发明专利]基于靶标催化的无酶无标记双尾杂交生物传感器及制备方法

摘要

本发明涉及生物传感器技术领域，特别涉及基于靶标催化的无酶无标记双尾杂交生物传感器及制备方法。杂交链式反应（HCR）是检测低浓度miRNA的有效方法，然而当前的HCR仍然受到诸多问题影响，如有限的扩增效率，复杂的设计等问题。我们提供了一种靶标催化的无酶和无标记双尾杂交链反应(DtHCR)，用于生物样品中miRNA‑21的超灵敏检测。该方法包含两个部分：靶目标催化发卡组装，形成双尾杂交的主干部分，然后辅助探针杂交形成支链部分。该方法包含两步信号放大过程，能够由单个靶标引发组装大量双尾杂交链，从而提供定位活细胞中单个靶分子的潜力。

主权项

1.一种基于靶标催化的无酶无标记双尾杂交生物传感器的制备方法，其特征在于；包含以下步骤：（1）用Al₂O₃抛光粉打磨直径为2mm的金电极至镜面，超纯水冲洗干净；（2）取8μL、1μM的H2固定液滴加到电极表面，盖上电极帽，室温下孵育2h，超纯水冲洗电极表面，氮气吹干；（3）取8μL、2mM的巯基乙醇溶液滴加到步骤（2）所得电极表面，盖上电极帽，室温孵育1.5h，封闭电极表面的非特异性活性位点，超纯水冲洗电极表面，氮气吹干；（4）取10μL含有目标miRNA和1μΜ H1的杂交缓冲液滴加在步骤（3）所得的电极上，盖上电极帽，室温下孵育2h，超纯水冲洗电极表面，氮气吹干；（5）取10μL含有四种辅助探针各1μΜ的杂交缓冲液滴加在步骤（4）所得的电极上，盖上电极帽，室温孵育2h，超纯水冲洗电极表面，氮气吹干；（6）将含有50μΜ六氨合钌的电化学检测液通氮气，20min；（7）步骤（5）所得的电极置于步骤（6）所得的电化学检测液中，浸泡1h，使六氨合钌吸附在DNA双链上；（8）步骤（7）所得的电极置于电化学检测液中，电化学工作站在‑0.6~0.1电势范围内用差分脉冲伏安法扫描。