[发明专利]一种蝴蝶兰脱毒苗培养繁殖方法

摘要

本发明涉及蝴蝶兰种苗繁育技术领域，具体涉及一种蝴蝶兰脱毒苗培养繁殖方法，具体包括以下步骤：选取健壮、带病毒的蝴蝶兰植株，消毒后用壳聚糖溶液浸泡，再进行初代培养，挑选出初代培养获得的病毒阴性丛生芽进行继代培养，最后选择继代培养后获得的长势好的小苗继续进行壮苗培养、生根培养和移栽。本发明提供的蝴蝶兰脱毒苗培养繁殖方法，获得的蝴蝶兰苗株品质好、脱毒率高且长势健壮，实现蝴蝶兰的无病毒栽培。

主权项

1.一种蝴蝶兰脱毒苗培养繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)材料选取选用生长健壮、经检测后携带病毒的蝴蝶兰植株，除去叶片留取茎；(2)材料消毒将步骤(1)中留取的蝴蝶兰茎用水冲洗后，用质量分数为70％的酒精溶液浸泡，再用质量分数为1.0％次氯酸钠溶液消毒10‑30分钟后，用无菌水冲洗；最后用质量分数为0.1％的升汞溶液浸泡5‑15min，用无菌水冲洗；所述升汞溶液中加有吐温，吐温在升汞溶液中的质量分数为0.08％‑0.12％；(3)材料预处理将消毒后的蝴蝶兰茎浸泡在1‑2g/L壳聚糖溶液中20‑30min；(4)初代培养将步骤(3)中处理过的蝴蝶兰茎切取茎尖，切取大小为0.2‑1mm，留取1个叶原基；接种于初代培养基上培养，培养温度24‑26℃，先暗培养2周，再置于光照为1500‑5000LX的环境下培养2个月，光照时间为10‑16h/日，待两片真叶展开形成丛生芽；所述初代培养基组分为：1/3MS+3.5mg/L 6‑BA+0.5mg/L NAA+0.3mg/L GA3+15g/L蔗糖+100mL/L椰汁+4.5‑5.5g/L琼脂+0.1g/L VC+20mg/L PVP，pH为5.4‑5.8；(5)继代培养将步骤(4)中生长出的丛生芽进行病毒检测，挑选出病毒阴性丛生芽转入继代培养基继代培养1个月，培养温度24‑26℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500‑2000lx；所述继代培养基组分为：1/3MS+5mg/L 6‑BA+0.1‑0.3mg/L NAA+0.3mg/L GA3+20g/L蔗糖+50mL/L柠檬汁+0.1g/L VC+1‑2g/L壳聚糖，pH为5.4‑5.8；(6)壮苗培养：继代培养后，选择高2cm以上、基部有明显突起的小苗转入壮苗培养基中培养10‑15天，培养温度24‑26℃，光照时间为13h/d，光照强度为1500‑8000lx；所述壮苗培养基为：1/2MS+0.1mg/L NAA+0.1mg/L GA3+30‑35g/L蔗糖+0.1g/L VC+100mL/L柠檬汁，pH为5.4‑5.8；(7)生根培养：将步骤(6)获得的壮苗植株新梢基部浸入50‑100mg/L的IBA中4‑8h，然后转入生根培养基中进行生根培养，培养温度24‑26℃，光照时间为13h/d，光照强度为5000‑15000lx；所述生根培养基组分为：1/2MS+100mL/L椰汁+40g/L土豆泥+20g/L蔗糖+30mg/L活性炭，pH5.4‑5.8；(8)移栽待步骤(7)中的壮苗生长至4‑5cm高、根系3条以上、叶1‑2片时，将壮苗放在自然光下炼苗5‑7天；然后取出培养苗，用无菌水清洗根部，然后移栽至培养基质中，保持湿度和通风，空气湿度为75‑85％，温度为20‑25℃，光照5000‑20000lx。