[发明专利]一种表达shRNA的AAV辅助包装载体、构建筛选方法和应用在审
| 申请号： | 201910443566.4 | 申请日： | 2019-05-27 |
| 公开（公告）号： | CN110184297A | 公开（公告）日： | 2019-08-30 |
| 发明（设计）人： | 李华鹏 | 申请（专利权）人： | 广州派真生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/861 | 分类号： | C12N15/861;C12N15/66;C12N7/00 |
| 代理公司： | 广州胜沃园专利代理有限公司 44416 | 代理人： | 张帅 |
| 地址： | 510000 广东省广州市高新技术产业*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种表达shRNA的AAV辅助包装载体及该载体的构建方法、筛选方法和应用；所述载体基于Rep2与CapDJ辅助包装载体，在CMV启动子驱动下的miR33‑5’UTR和miR33‑3’UTR之间插入克隆shRNA的位点2×BsmBI，shRNA表达小片段连接入所述骨架载体的2xBsmBI位点。所述载体的构建方法包括：制备克隆用骨架；制备shRNA表达小片段；将shRNA表达小片段连接至克隆用骨架载体上。所述筛选方法包括：用所述载体转化Stbl3感受态细菌，质粒提取；将提取的质粒共转染293T细胞；滴度比较筛选。本发明实现提高AAV生产效率约60％以上。 | ||
| 搜索关键词： | 辅助包装 小片段 构建 筛选 位点 制备 克隆 克隆用骨架载体 基因工程领域 感受态细菌 骨架载体 生产效率 质粒共转 质粒提取 滴度 应用 细胞 驱动 转化 | ||
【主权项】：
1.一种表达shRNA的AAV辅助包装载体，其结构如图1所示，其是在Rep2与CapDJ辅助包装载体中CMV启动子驱动下的miR33‑5’UTR和miR33‑3’UTR之间插入克隆shRNA的位点2x BsmBI，将shRNA表达小片段连接入骨架载体的2xBsmBI位点，并以合成的pA终止子终止转录，其中miR33‑5’UTR的序列如SEQ ID NO:1所示，miR33‑3’UTR的序列如SEQ ID NO:2所示。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于广州派真生物技术有限公司，未经广州派真生物技术有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201910443566.4/，转载请声明来源钻瓜专利网。
