[发明专利]一种对食用生蛋中的致病菌及总菌数进行定量检测的方法在审
| 申请号： | 201910447209.5 | 申请日： | 2019-05-27 |
| 公开（公告）号： | CN110218763A | 公开（公告）日： | 2019-09-10 |
| 发明（设计）人： | 颜晓梅;毛翠萍;王旭正;薛乘风 | 申请（专利权）人： | 厦门大学 |
| 主分类号： | C12Q1/06 | 分类号： | C12Q1/06;G01N21/64 |
| 代理公司： | 北京英创嘉友知识产权代理事务所(普通合伙) 11447 | 代理人： | 苏瑞 |
| 地址： | 361005 *** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本公开涉及一种对食用生蛋中的致病菌及总菌数进行定量检测的方法，该方法包括以下步骤：S1.将待测食用生蛋样品进行匀浆；S2.将蛋液样品稀释后进行蛋白降解处理和去脂处理；S3.将处理后的蛋液样品进行膜过滤；S4.将过滤后的蛋液样品进行离心洗涤并去除上清，将离心所得沉淀用悬浮介质悬浮；S5.使用致病菌特异性探针对蛋液悬浮液进行第一荧光标记，并使用核酸染料对所述蛋液悬浮液进行第二荧光标记；S6.使用高灵敏度流式细胞术对所述检测上样悬浮液中颗粒的荧光进行检测；该方法适用于各种食用生蛋及液蛋样品的检测，可对样品中的目标致病菌和总菌数进行同时定量检测，包括各种致病菌、非致病菌等。 | ||
| 搜索关键词： | 致病菌 蛋液 定量检测 悬浮液 总菌数 食用 荧光标记 检测 流式细胞术 蛋白降解 非致病菌 高灵敏度 核酸染料 离心洗涤 悬浮介质 样品稀释 膜过滤 中颗粒 荧光 去除 去脂 上样 液蛋 匀浆 沉淀 过滤 悬浮 | ||
【主权项】：
1.一种对食用生蛋中的致病菌及总菌数进行定量检测的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：S1.将待测食用生蛋样品进行匀浆，得到蛋液样品；S2.将所述蛋液样品稀释后进行蛋白降解处理和去脂处理，以降解所述蛋液样品中的蛋白成分和脂肪成分，得到处理后的蛋液样品；S3.将所述处理后的蛋液样品进行膜过滤，得到过滤后的蛋液样品，所述膜过滤所采用的过滤膜的孔径为5～10μm；S4.将所述过滤后的蛋液样品进行离心洗涤并去除上清，将离心所得沉淀用悬浮介质悬浮，得到蛋液悬浮液；S5.使用致病菌特异性探针对所述蛋液悬浮液进行第一荧光标记，并使用核酸染料对所述蛋液悬浮液进行第二荧光标记，得到检测上样悬浮液；S6.使用高灵敏流式细胞术对所述检测上样悬浮液中颗粒的荧光进行检测，并且根据所述检测上样悬浮液中颗粒的第一荧光信号所转换得到的电信号计算所述待测食用生蛋中的致病菌数量，根据所述检测上样悬浮液中颗粒的第二荧光信号所转换得到的电信号计算所述待测食用生蛋样品中的细菌总数量。
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