[发明专利]一种产两性霉素B的重组结节链霉菌及其应用

摘要

本发明公开了一种产两性霉素B的重组结节链霉菌及其应用，所述重组结节链霉菌是敲除结节链霉菌ZJB2016050(Streptomyces nodosus ZJB2016050)内两性霉素B的竞争支路后，再将SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5所示功能基因串联序列导入获得的；通过导入功能基因，使两性霉素B骨架合成前体供给量全面提升，提高菌种对营养物质的利用率，改变目标产物的营养物质流向。通过敲除竞争支路提高AmB产量约20％，副产物两性霉素A降低40％，通过过表达串联功能基因验证提高三类前体乙酰辅酶A，丙二酰辅酶A和甲基丙二酰辅酶A大幅提升两性霉素B的产量，最终在5L发酵罐发酵，两性霉素B产量可达到16g/L。

主权项

1.一种高产两性霉素B的重组结节链霉菌，由结节链霉菌ZJB2016050(Streptomyces nodosus ZJB2016050)基因敲除SEQ ID NO.6所示的PKS5基因簇后，再导入SEQ ID NO.1所示乙酰辅酶A羧化酶1基因、SEQ ID NO.2所示乙酰辅酶A羧化酶2基因、SEQ ID NO.3所示聚酮合酶PKSamphA基因、SEQ ID NO.4所示甲基丙二酰辅酶A变位酶基因和SEQ ID NO.5所示甲基丙二酰辅酶A异构酶基因的串联基因获得。