[发明专利]基于重组酶扩增和G-四连体的层出镰刀菌目视检测方法在审
| 申请号： | 201910451936.9 | 申请日： | 2019-05-28 |
| 公开（公告）号： | CN110452965A | 公开（公告）日： | 2019-11-15 |
| 发明（设计）人： | 王莹;时鹏飞 | 申请（专利权）人： | 临沂大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844;C12Q1/04;C12R1/77 |
| 代理公司： | 11670 北京栈桥知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 刘亚娟<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 276000山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于重组酶扩增和G‑四连体DNAzyme的层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)目视检测方法，包括以下步骤：(1)以NaOH溶液裂解待测样品细胞壁结构，得到基因组DNA粗提液；(2)根据目的基因设计用于进行RPA反应的特异性引物1和引物2；(3)以粗提液中的基因组DNA为模板进行不对称RPA反应，反应得到带有G‑四连体序列的单链和双链DNA扩增产物；(4)在含有扩增产物的溶液中加入hemin和NH4+，孵育1小时，单链DNA3′‑末端折叠成具有G‑四连体结构的DNAzyme；(5)最后向含有该酶的溶液中加入一定浓度的ABTS和H2O2，二十分钟后观察颜色是否变化，显色为绿色的样品为阳性，不显色则样品为阴性。 | ||
| 搜索关键词： | 基因组DNA 扩增产物 粗提液 单链 连体 显色 四连体结构 特异性引物 细胞壁结构 待测样品 目的基因 目视检测 双链DNA 不对称 镰刀菌 重组酶 折叠 孵育 扩增 裂解 阴性 引物 观察 | ||
【主权项】：
1.一种基于重组酶扩增和G-四连体DNAzyme的层出镰刀菌目视检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)以NaOH溶液裂解待测样品细胞壁结构，得到待测样品的基因组DNA粗提液；/n(2)根据目的基因设计用于进行RPA反应的特异性引物1和引物2；/n(3)构建包括步骤(1)中提取分离的所述基因组DNA，步骤(2)中所述引物1和引物2的RPA扩增反应体系，进行不对称RPA反应，反应得到带有G-四连体序列的单链DNA和双链DNA扩增产物；/n(4)加入Hemin、NH4+进行孵育，单链DNA 3′-末端折叠成具有G-四连体结构的DNAzyme；/n(5)最后向含有所述具有G-四连体结构的DNAzyme的溶液中加入一定浓度的ABTS和H2O2，直接观察颜色是否变化，显色为绿色的样品为阳性，不显色则样品为阴性。/n
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