[发明专利]重组金黄色葡萄球菌疫苗的规模化制备方法

摘要

本发明公开了重组金黄色葡萄球菌疫苗的规模化制备方法，蛋白工作种子批菌种开启后接种于一个三角瓶中，将一代生产菌种接种于种子罐中进行传二代培养，将二代生产菌种接种于发酵罐中进行传三代培养；发酵结束后，菌液通过连续流离心去除上清收获菌体；菌体溶解，破菌；进行结合，结合完成后，对其进行清洗，进行酶切，采用层析柱对蛋白酶切液进行纯化然后脱盐、去内毒素、除菌过滤保存。本发明的制备方法简单，能大规模制备得到重组金黄色葡萄球菌蛋白。

主权项

1.重组金黄色葡萄球菌疫苗的规模化制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)蛋白工作种子批菌种开启后接种于一个三角瓶中，接种量为菌种：培养基＝1ml：100ml，培养6～10小时，为一代生产菌种；(2)将一代生产菌种接种于种子罐中进行传二代培养，接种量为一代菌种：培养基＝1ml：2000ml，培养6～10小时，为二代生产菌种；培养过程中每小时取样检测OD600值，当OD600值大于1.5时种子罐培养结束，结束后取菌液样品进行染色镜检，细菌应为革兰氏阴性杆菌；(3)将二代生产菌种接种于发酵罐中进行传三代培养，接种量为二代菌种：培养基＝1ml：9ml培养结束后取菌液样品进行染色镜检，细菌应为革兰氏阴性杆菌；(4)发酵结束后，菌液通过连续流离心去除上清收获菌体；(5)领取菌体使其溶解，待菌体溶解后，使用匀质机破菌，收集上清，澄清过滤；(6)按照5ml：1ml将破菌上清与谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和填料混合；在20～25℃条件下进行结合，结合时间4～10h，结合完成后，对其进行清洗，清洗完成后按照凝胶：PP酶溶液＝5ml：1ml加入PP酶溶液，垂直混悬器转速为11～12rpm，20～25℃条件下进行酶切6～12h，酶切完成后，收获酶切液，除菌过滤；(7)采用层析柱对蛋白酶切液进行纯化；(8)采用层析柱对蛋白液进行脱盐；(9)采用层析柱对蛋白脱盐样去内毒素；(10)将去内毒素的蛋白溶液经除菌过滤，放‑80℃冰柜保存。