[发明专利]一种链霉素适配体的Non-SELEX筛选方法

摘要

本发明为一种链霉素适配体的Non‑SELEX筛选方法。对链霉素与随机单链寡核苷酸文库混合孵育后的溶液进行毛细管电泳分离，利用单链寡核苷酸与链霉素结合后与游离单链寡核苷酸的质荷比差异可使二者分离。将电泳开始后的0‑17min作为收集时间窗口，可以有效收集与链霉素结合的单链寡核苷酸。将其作为次级文库再次筛选，经过仅4轮筛选即可得到对链霉素具有高亲和力适配体。

主权项

1.一种链霉素适配体的Non‑SELEX筛选方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)将5μL浓度20g/L的小分子靶标链霉素与45μL浓度100μmol/L的变性处理后随机ssDNA文库室温混合孵育30min，形成由靶标‑ssDNA复合物、游离ssDNA和游离靶标组成的混合物溶液；(2)将混合物溶液注入毛细管柱进行毛细管电泳分离，从电泳开始到游离ssDNA电泳峰前沿之间的时间段被用作收集时间窗口，收集其间从毛细管中流出的溶液；此过程重复10次，合并该10次过程中收集到的电泳流出溶液作为次级文库，至此第1轮筛选结束；(3)取45μL变性处理后的次级文库与5μL浓度20g/L的链霉素室温混合孵育30min，重复步骤(2)，完成第2轮筛选；第3轮以后筛选步骤同第2轮；(4)对第4轮筛选后获得的收集溶液进行对称PCR，对PCR扩增产物进行凝胶电泳纯化，纯化后产物进行高通量测序；(5)从测序结果中将出现频率由高至低排列在前7位的序列选出并进行合成；(6)对合成的各序列测定解离常数，从中选出解离常数最小的序列，此即最后确定的链霉素适配体。