[发明专利]一种化学裂解法制备T载体的方法在审
| 申请号： | 201910473843.6 | 申请日： | 2019-06-01 |
| 公开（公告）号： | CN110129347A | 公开（公告）日： | 2019-08-16 |
| 发明（设计）人： | 田文奇;袁慧 | 申请（专利权）人： | 苏州博睐恒生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 215300 江苏省苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种化学裂解法制备T载体的方法，利用RNA‑DNA嵌合引物扩增质粒载体；用限制性核酸内切酶Dpn I对野生型质粒模板进行消化处理，消除野生型质粒导致的阴性背景克隆；将PCR扩增的线性化载体进行化学裂解法处理，得到T载体。通过上述方式，本发明的方法直接简单的PCR扩增即可制备T载体的线性化片段，消除了限制性核酸内切酶法和末端脱氧核苷酸转移酶法的技术缺陷，简单处理便能得到T载体。 | ||
| 搜索关键词： | 化学裂解法 制备 限制性核酸内切酶 野生型质粒 末端脱氧核苷酸转移酶 线性化载体 技术缺陷 嵌合引物 消化处理 质粒载体 线性化 扩增 阴性 克隆 | ||
【主权项】：
1.一种化学裂解法制备T载体的方法，其特征在于，包括步骤为：（1）利用RNA‑DNA嵌合引物扩增质粒载体，得到扩增后的质粒载体；（2）用限制性核酸内切酶Dpn I消除步骤（1）得到的所述扩增后的质粒载体中的环状质粒模板；（3）根据步骤（1）中所述RNA‑DNA嵌合引物的修饰特征，对步骤（2）限制性核酸内切酶DpnI处理后的质粒载体PCR片段进行化学裂解法处理，得到T载体。
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