[发明专利]一种基于RGO-CS-Fc/Au NPs纳米复合材料结合适配体检测甲胎蛋白的方法

摘要

一种基于RGO‑CS‑Fc/Au NPs纳米复合材料结合适配体检测甲胎蛋白的方法，采用电沉积技术以及静电吸附作用将RGO‑CS‑Fc/Au NPs修饰在丝网印刷电极表面。通过纳米技术以及分子间作用力将AFP适配体负载在RGO‑CS‑Fc/Au NPs材料表面，适配体因其不稳定的空间结构而以单链结构的形式存在复合材料表面。在电极表面中加入AFP后，AFP能够与AFP适配体特异性结合，生成稳定的空间结构，从而可以有序的排列在电极表面。通过DPV方法检测电流值，并描绘出该电流与甲胎蛋白浓度的关系曲线，实现对甲胎蛋白的定量检测。该方法操作简单、省时、费用低且具有较低的检测限。

主权项

1.一种基于RGO‑CS‑Fc/Au NPs纳米复合材料结合适配体作为识别探针检测甲胎蛋白的方法，按以下步骤进行：步骤1：RGO‑CS‑Fc材料的制备（1）RGO的制备：将GO倒入蒸馏水中，使用超声细胞破碎仪超声，使其充分溶解均匀，制成GO水溶液；取上述GO水溶液，加入抗坏血酸，使其还原GO，得RGO；（2）CS‑Fc的制备：将CS加入乙酸溶液中，得壳聚糖溶液；将Fc与上述壳聚糖溶液混合，以EDC/NHS活化，搅拌得CS‑Fc复合物；（3）RGO‑CS‑Fc复合材料的制备：取RGO悬液加入到CS‑Fc溶液中，EDC/NHS活化，离心分离得RGO‑CS‑Fc悬浊液；步骤2：电极的修饰与生物传感界面的构建（1）将丝网印刷电极置于H₂SO₄溶液中，进行循环伏安扫描，得到活化后的丝网印刷电极；（2）将活化后的丝网印刷电极置入氯金酸溶液中，进行恒电位沉积，沉积结束后用水将电极冲洗干净，得到Au NPs/SPE电极；（3）将Au NPs/SPE电极用戊二醛浸泡，用PBS洗涤，吹干；滴加RGO‑CS‑Fc悬浊液孵育，PBS洗涤，晾干，得到RGO‑CS‑Fc/Au NPs/SPE电极；（4）取氨基化的AFP aptamer滴加到传感器界面，孵育一段时间，用PBS溶液洗涤未固定到界面的AFP适配体，滴加牛血清蛋白溶液进行封闭，得到AFP aptamer /RGO‑CS‑Fc/Au NPs/SPE传感界面，晾干备用；步骤3：甲胎蛋白的工作曲线绘制（1）将标准AFP溶液滴加到步骤2得到的AFP aptamer /RGO‑CS‑Fc/Au NPs/SPE传感界面，孵育，PBS溶液清洗，得到工作电极，晾干备用；（2）将工作电极放入PBS溶液中，采用电化学工作站的DPV扫描，记录其峰电流；（3）分别对不同浓度的甲胎蛋白进行检测，绘制标准曲线，计算出该方法的最低检测限；步骤4：实际样品中AFP的检测（1）在步骤2得到的AFP aptamer /RGO‑CS‑Fc/Au NPs/SPE传感界面，滴加待测实际样品，孵育，用PBS溶液清洗，得到工作电极，晾干备用；（2）将工作电极放入PBS溶液中，采用电化学工作站的DPV扫描，记录其峰电流；（3）根据步骤3所述标准曲线，得到所述待测实际样品中甲胎蛋白的浓度。