[发明专利]一种检测端粒内氧化性损伤的荧光化学传感器及其检测方法和应用

摘要

本发明提供一种检测端粒内氧化性损伤的荧光化学传感器及其检测方法和应用。本发明中将修复酶的特异性与末端脱氧核苷酸转移酶介导的聚合延伸相结合，以启动核酸内切酶IV诱导的循环切割信号探针，诱导Endo IV裂解信号探针中的AP位点，导致信号探针上AF488荧光团的释放，同时产生具有游离3'‑OH末端的信号探针。具有游离3'‑OH的每个信号探针可以通过TdT有效地延长以产生长的poly‑A序列。释放的poly‑A序列和新产生的poly‑A序列可以诱导信号探针的多次循环切割，释放出更多的AF488荧光团。在磁力分离下，上清液中的荧光团可以通过单分子成像定量。具有良好的实际应用之价值。

主权项

1.一种检测端粒内氧化性损伤的荧光化学传感器，其特征在于，所述荧光化学传感器至少包括信号探针、捕获探针和辅助探针；所述信号探针为具有脱嘌呤嘧啶位点的富T单链DNA序列，所述信号探针5'端修饰有生物素，所述信号探针3'端修饰有荧光基团，优选使用AF488进行修饰；优选的，所述信号探针与链霉抗生物素蛋白包被的磁珠进行缀合；所述捕获探针用于捕获富集端粒，其具有与端粒杂交的单链DNA序列，所述捕获探针3'端进行生物素化修饰；所述辅助探针为3'端用ddC修饰的单链DNA序列，其与单链端粒杂交形成甲酰胺嘧啶[fapy]‑DNA糖基化酶的dsDNA底物。