[发明专利]鸡毒支原体对泰乐菌素的耐药判定标准试验方法

摘要

本发明公开了鸡毒支原体对泰乐菌素的耐药判定标准试验方法，包括建立泰乐菌素对鸡毒支原体的耐药检测方法、制定泰乐菌素对鸡毒支原体的野生型临界值、制定泰乐菌素对鸡毒支原体的药效学临界值、制定泰乐菌素对鸡毒支原体的临床临界值以及参考CLSI公布的折点制定的流程图，符合COWT＞COPD＞COCL,对应的折点值应该选择野生型临界值，得到鸡毒支原体对泰乐菌素的耐药判定标准；通过本发明方法可以得出鸡毒支原体对泰乐菌素的耐药判定标准，能够为科学养殖提供稳定的用药数据支持，能更科学的进行指导临床用药，安全性高，能有效减缓鸡毒支原体对泰乐菌素的耐药性产生，保护和维持泰乐菌素的有效性。

主权项

1.鸡毒支原体对泰乐菌素的耐药判定标准试验方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：建立泰乐菌素对鸡毒支原体的耐药检测方法：以金黄色葡萄球菌ATCC29213作为质控菌株，泰乐菌素作为质控药物，测定泰乐菌素对临床分离鸡毒支原体的MIC；步骤二：制定泰乐菌素对鸡毒支原体的野生型临界值(CO_WT)：首先从临床感染鸡只中分离获取出鸡毒支原体107株，与实验室保存的标准菌株4株组成共111株鸡毒支原体，然后采用肉汤稀释法测定了泰乐菌素对111株鸡毒支原体的MIC值，将得到的MIC数据带入Ecoffinder软件，进行线性回归模拟，得到不同置信区间下的野生性临界值；步骤三：制定泰乐菌素对鸡毒支原体的药效学临界值(CO_PD)：选取了MIC₉₀的菌株进行鸡胚毒力实验，选择SPF级鸡胚进行鸡胚感染实验，将鸡胚孵化至7日龄，在强光照下找到鸡胚的胚胎并标记其与气室的位置，选择卵黄囊接种方法，接种剂量为10⁶CCU，每日观察鸡胚情况，记录每日鸡胚死亡数量，最终选择M17菌株进行PK‑PD试验，制定药效学临界值，将得到的PK‑PD数据利用Crystalball7软件进行蒙特卡洛模拟，选取达标率在90％以上所对应的最大MIC值为药效学临界值；步骤四：制定泰乐菌素对鸡毒支原体的临床临界值(CO_CL)：选取了5个不同的MIC的菌株进行鸡胚毒力实验，选择SPF级鸡胚进行对鸡毒支原体的毒力鉴定，将鸡胚孵化至7日龄，在强光照下找到鸡胚的胚胎并标记其与气室的位置，实验选择卵黄囊接种方法，接种剂量为10⁶CCU，每日观察鸡胚情况，记录每日鸡胚死亡数量，最终选择M1、M11、M17、M23和M24菌株进行临床治疗试验，制定泰乐菌素对鸡毒支原体的临床临界值，临床试验制定的临床临界值可通过“WindoW”计算、非线性回归和二分树(CART)分析方式进行验证；步骤五：根据泰乐菌素对鸡毒支原体的野生型临界值、泰乐菌素对鸡毒支原体的药效学临界值和泰乐菌素对鸡毒支原体的临床临界值，利用折点制定流程图来制定最终的折点，得出鸡毒支原体对泰乐菌素的耐药判定标准。