[发明专利]一种高纯人凝血因子IX制剂的生产方法

摘要

本发明公开了一种工艺步骤少、生产成本低、高比活性的高纯人凝血因子IX制剂生产方法。包括以下步骤：(1)血浆冷沉淀去除；(2)DEAE sephadex A50阴离子交换层析；(3)S/D灭活病毒；(4)非Ca2+依赖型IX因子免疫亲和层析；(5)配液加保护剂；(6)纳滤膜除病毒过滤；(7)分装，冷冻干燥。本发明通过采用高吸附特异性的新型免疫亲和层析极大简化了人凝血因子IX生产工艺，所制得的高纯人凝血因子IX成品效价可达114.2IU/ml，IX因子比活性高达196.5IU/mg蛋白以上；此外，本发明采用了具有高度成熟性与安全性的S/D法+纳滤法进行两步病毒灭活，有效保证了制品的安全性。

主权项

1.一种高纯人凝血因子IX制剂的生产方法，其特征在于包含以下步骤：(1)血浆冷沉淀的去除：以新鲜冷冻人血浆为原料，经融浆，混浆，连续离心等工序去除血浆中的冷沉淀，得到无冷沉淀的血浆离心上清液；(2)离子交换凝胶吸附：血浆温度控制在10‑15℃，按照1.0‑1.5g干凝胶/L血浆，向去冷沉淀血浆中加入平衡后的DEAE‑sephadex A‑50凝胶，搅拌吸附45min后关闭搅拌，静置沉降45min。凝胶吸附后的血浆使用连续过滤器进行过滤，收集吸附后的A‑50凝胶，血浆滤过液并入血浆罐；(3)装柱洗脱：将吸附后的A‑50凝胶装填在固定床层析柱内，装填好的层析柱泵入洗涤液进行在线冲洗，洗涤液流速为30‑40cm/h，冲洗时间约60‑90min。洗涤后的A‑50凝胶使用洗脱液进行在线洗脱，洗脱液流速为30‑40cm/h，待在线紫外检测器中的紫外吸收值低于500mAu后停止洗脱，收集洗脱液并使用0.45um滤芯过滤；(4)S/D灭活并稀释：温和搅拌下将配置好的S/D灭活液缓慢加入过滤后的洗脱液中，添加完毕后搅拌30min。调整液温为24‑26℃，灭活6h；(5)亲和层析：将琼脂糖免疫亲和凝胶装填在固定床层析柱内，装填好的层析柱使用平衡液平衡5‑10个柱体积，S/D灭活后料液流入层析柱，上样流速为50‑80cm/h。上样完成后使用两种不同的洗涤液进行复合洗涤，洗涤液流速为50‑80cm/h。洗涤后的层析柱使用洗脱液进行洗脱，洗脱液流速为50‑80cm/h，待在线紫外检测器中的紫外吸收值低于100mAu后停止洗脱，收集洗脱液；(6)配液：向洗脱液中加入保护剂，所述保护剂为盐、糖、氨基酸或其混合物；使用稀释液对洗脱液进行稀释，调节活力为30‑40IU/ml，pH7‑7.5，使用0.45um滤芯过滤；(7)纳滤膜除病毒过滤；(8)分装，冷冻干燥，得到高纯人凝血因子IX制剂成品。