[发明专利]一种利用微液滴催化芦丁产异槲皮苷的酶催化反应体系在审
| 申请号： | 201910495452.4 | 申请日： | 2019-06-10 |
| 公开（公告）号： | CN110272929A | 公开（公告）日： | 2019-09-24 |
| 发明（设计）人： | 彭强民;汪波;张凡;黄代杰;叶王胜;王俊 | 申请（专利权）人： | 江苏科技大学 |
| 主分类号： | C12P19/60 | 分类号： | C12P19/60;C12N15/70;C12N9/24;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 楼高潮 |
| 地址： | 212003*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 一种利用微液滴催化芦丁产异槲皮苷的酶催化反应体系。应用流动聚焦型芯片，以重组菌株E.coli BL21(DE3)‑pET21a‑rhaB1发酵获得的粗酶液和含底物的缓冲液按相比1:1(v/v)混合为分散相，硅油为连续相，调控分散相和连续相的压力范围为25～200mbar，制备微液滴。配制芦丁溶液和α‑L‑鼠李糖苷酶的粗酶液，应用微液滴酶制备活性产物异槲皮苷。将含微液滴酶反应体系的导管置于25～60℃，0.1～5h后取出，收集导管内备用。本发明采用微流控芯片可制备特定的液滴，将其作为独立的微反应器，具有体积小、比表面积大、环境封闭且稳定、药品用量少、无交叉污染等优势，并能提高酶促合成效率。 | ||
| 搜索关键词： | 微液滴 异槲皮苷 芦丁 酶催化反应体系 粗酶液 连续相 制备 催化 酶反应体系 鼠李糖苷酶 微流控芯片 环境封闭 活性产物 交叉污染 酶促合成 收集导管 微反应器 药品用量 重组菌株 分散相 缓冲液 聚焦型 酶制备 体积小 导管 底物 硅油 液滴 备用 发酵 配制 应用 取出 芯片 调控 流动 | ||
【主权项】：
1.一种利用微液滴催化芦丁产异槲皮苷的酶催化反应体系，其特征在于，所述酶催化反应体系通过以下步骤构建：步骤1，构建重组菌株E.coli BL21(DE3)‑pET21a‑rhaB1，培养并诱导表达，诱导表达结束后，离心使得细胞破碎，取上清液，即粗酶液备用；步骤2，用pH4.0～8.0的PBS缓冲液配制浓度为0.01～1g/L的芦丁溶液，再取浓度为30.00U/mg的粗酶液，等体积混合得微液滴形成所需水相即分散相，粘度为5 CS的聚二甲基硅氧烷甲基硅油作为微液滴形成所需油相即连续相；步骤3，应用微液滴芯片，选取分散相压力为25～200mbar，连续相压力为25～200mbar，操作微液滴形成装置形成微液滴，待液滴稳定、均一后，收集于密封PTFE中进行酶催化反应，待反应结束后，用恒流泵冲洗出来产物异槲皮苷，并进行含量检测。
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