[发明专利]一种全血DNA提取用纳米生物磁珠的制备方法

摘要

本发明涉及一种用于全血DNA提取的纳米生物磁珠的制备方法，属于生物工程领域；其制备过程包含以下步骤：步骤1：纳米四氧化三铁颗粒制备；步骤2：将磁性纳米Fe3O4颗粒沉积在聚苯乙烯微球上；步骤3：表面包被聚乙烯醇，并用戊二醛进行封闭。所制备出的磁珠，其粒径均一，磁响应性能强，用于全血DNA提取可以得到高质量的DNA样本，尤其在去除样本中的无机盐杂质方面表现优异。

主权项

1.一种全血DNA提取用纳米生物磁珠的制备方法，其特征在于：包含以下步骤：步骤一：纳米四氧化三铁颗粒制备分别配制浓度均为0.05～5mol/L的Fe³⁺盐溶液和Fe²⁺盐溶液，按照Fe3+与Fe2+物质的量的比为1.3～2.2混合，通入惰性气体除氧30min；加入表面活性剂，调整反应体系温度至60～70℃，得混合液；向混合液中滴加质量浓度为25％氨水至PH值为10～11，保持70～80℃反应3～6h，冷却至室温后，磁分离出黑色沉淀，依次用质量浓度为1％氨水、体积百分比浓度为50%乙醇及去离子水洗涤沉淀物数次至中性；‑10～‑20℃冷冻干燥24～48h，得到超顺磁性Fe₃O₄纳米颗粒；步骤二：将超顺磁性Fe₃O₄纳米颗粒沉积在聚苯乙烯微球上取10～200g聚苯乙烯微球，分散在5L乙醇水溶液中，超声搅拌3～15h，保持温度不低于50℃；加入表面活性剂100～300ml，加入步骤一所得到的超顺磁性Fe₃O₄纳米颗粒10～200g，降低温度至20℃以下并保持1～3h；磁分离出沉淀，向沉淀中加入稀盐酸，搅拌2～5h，然后用超纯水洗涤至溶液呈中性，‑10～‑20℃冷冻干燥24～48h，得到Fe₃O₄@苯乙烯磁性纳米颗粒；步骤三：表面包被聚乙烯醇，并用戊二醛进行封闭将100‑1000ml纯水加热到50‑80℃，超声搅拌状态下加入10‑50g聚乙烯醇和100‑500ul表面活性剂，升温到85℃，直至溶解，调节PH到3‑5；添加步骤二所得到的Fe₃O₄@苯乙烯磁性纳米颗粒100～1000g，添加分散剂，超声搅拌，并逐渐降低温度至50℃，加入戊二醛，保持温度继续搅拌3h，得到纳米生物磁珠；将所得纳米生物磁珠用体积百分比浓度为40%～80%的乙醇洗涤，然后用超纯水洗涤至溶液呈中性，最后用超纯水分散保存。