[发明专利]一种温敏无规聚合物与凝集素相互作用的测定方法

摘要

本发明涉及一种温敏无规聚合物与凝集素相互作用的测定方法。该方法包括：温敏无规聚合物P(DEGMA‑co‑OVNGlu)溶液的配制，凝集素蛋白Con A溶液、凝集素蛋白BSA溶液以及凝集素蛋白RCA₁₂₀溶液配制，分别对Con A溶液、BSA溶液和RCA₁₂₀溶液紫外测试，紫外测试聚合物分别与Con A、BSA、RCA₁₂₀的相互结合，不同浓度的聚合物溶液进行动态光散射测试，聚合物溶液加入凝集素溶液后进行动态光散射测试。与其他测定方法(表面等离子体共振和等温滴定量热法)相比，该方法操作简单，成本低，测试分析速度快。

主权项

1.一种温敏无规聚合物与凝集素相互作用的测定方法，包括：(1)将温敏无规聚合物溶于HEPES缓冲溶液中配制成浓度为0.8‑1.2mg/mL的聚合物溶液，并逐级稀释，待用；其中温敏无规聚合物为温敏葡萄糖功能化的无规聚合物P(DEGMA‑co‑OVNGlu)；(2)将凝集素蛋白Con A、凝集素蛋白BSA、凝集素蛋白RCA₁₂₀分别溶于HEPES缓冲溶液中，将得到的Con A溶液、BSA溶液、RCA₁₂₀溶液分别逐级稀释，待用，其中稀释前Con A溶液、BSA溶液和RCA₁₂₀溶液的浓度为0.8‑1.2mg/mL；(3)分别移取步骤(2)中稀释后的Con A溶液、BSA溶液、RCA₁₂₀溶液于紫外分光光度计的比色皿中，在波长600nm处测试Con A溶液的吸光度随时间的变化，其中稀释后的Con A溶液浓度与稀释后的BSA溶液、稀释后的RCA₁₂₀溶液浓度相同，都是0.3mg/mL‑0.5mg/mL；(4)将步骤(2)中稀释后的Con A溶液、BSA溶液、RCA₁₂₀溶液分别与步骤(1)中稀释后的聚合物溶液移取于紫外分光光度计的比色皿中，经过平衡后，在波长600nm下分别测试聚合物和Con A的相互结合、聚合物和BSA的相互结合、聚合物和RCA₁₂₀的相互结合，其中稀释后的Con A溶液、BSA溶液、RCA₁₂₀溶液与稀释后的聚合物溶液的浓度相同；(5)分别移取不同浓度的聚合物溶液于光散射瓶中，然后放入激光光散射仪的样品池中，平衡后，测试聚合物的流体动力学直径以及聚合物的多分散指数随着缀合时间的变化；(6)待步骤(5)中聚合物溶液平衡后，加入稀释后的凝集素蛋白溶液，测试聚合物和凝集素蛋白混合后流体动力学直径以及聚合物的多分散指数随着缀合时间的变化，其中聚合物溶液与稀释后的凝集素蛋白溶液的浓度比为0.95‑1.5:2。