[发明专利]一种利用噬菌体抗体库高效筛选纤维蛋白原的方法

摘要

本发明公开了一种利用噬菌体抗体库高效筛选纤维蛋白原的方法，包括包被蛋白、封闭平板、噬菌体库去背景、噬菌体结合等步骤，本发明筛选出的噬菌体对比其余噬菌体，能够特异性结合人纤维蛋白原，且结合力强，易于加工，可以加入各种凝血材料中，通过靶向结合人纤维蛋白原，促使纤维蛋白原的富集，增强凝血效果，具有所用试剂简单易得，成功率高等特点。

主权项

1.一种利用噬菌体抗体库高效筛选纤维蛋白原的方法，其特征在于，所采用的步骤如下：/n1)包被蛋白：将人纤维蛋白原用包被液稀释，取该人纤维蛋白原溶液于细胞培养板中，将板置于湿盒中，在2-8℃温度下孵育过夜；/n2)封闭平板：将步骤1)中的板取出，加入封闭液，在2-8℃温度下孵育；/n3)噬菌体库去背景：将噬菌体十二肽库加入新的细胞培养板中，并在摇床平缓摇动；/n4)噬菌体结合：吸走步骤2)中培养板的封闭液，反复洗涤3-15次，然后将步骤3)中培养板的液体加入该洗涤后的培养板，在摇床平缓摇动1-4h；/n5)洗涤：将步骤4)中培养板的液体吸走，反复洗涤3-15次，得到步骤5)的培养板；/n6)洗脱：在步骤5)的培养板中加入洗脱液，室温静置10-30min，然后将液体转移至新的离心管中，加入中和液，得到噬菌体；/n7)噬菌体扩增及计数：将步骤6)所得噬菌体进行扩增并计数，稀释至10³-10¹³pfu/mL，得到步骤7)的噬菌体；/n8)再重复步骤1)至步骤7)二-五次，在进行重复的过程中，所述的步骤3)中噬菌体十二肽库改为上一轮步骤7)所得的噬菌体；/n9)对最后三轮步骤6)所得噬菌体进行测序，统计不同噬菌体出现的频数，出现频数最高的四组噬菌体为筛选得到的前四组噬菌体；/n10)对步骤9)所得到的前四组噬菌体进行进一步优选，得到最佳结合噬菌体，该噬菌体展示的多肽为最佳结合多肽。/n