[发明专利]土壤三域微生物高通量绝对定量方法在审
| 申请号： | 201910579419.X | 申请日： | 2019-06-29 |
| 公开（公告）号： | CN110218807A | 公开（公告）日： | 2019-09-10 |
| 发明（设计）人： | 汪海珍;杨黎;楼骏;严康;徐建明 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6869;C12Q1/10;C12Q1/06;C12R1/19 |
| 代理公司： | 杭州中成专利事务所有限公司 33212 | 代理人： | 金祺 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种土壤三域微生物高通量绝对定量方法，包括以下步骤：将三域通用内标菌株E.coli WYL重悬于无菌水中，得OD600nm为0.9～1.0的菌悬液；土壤样品中三域通用内标菌株的添加；土壤样品DNA提取；样品中三域通用内标菌株绝对定量；土壤样品高通量测序；三域微生物绝对含量计算。本发明实现三域微生物绝对含量表征，从而达到三域微生物间可以跨样本跨域相互比较的目的；为推进三域微生物为整体的群落研究提供技术支持。 | ||
| 搜索关键词： | 微生物 土壤样品 菌株 内标 高通量 通用 高通量测序 含量表征 含量计算 技术支持 菌悬液 土壤 跨域 水中 无菌 重悬 样本 研究 | ||
【主权项】：
1.土壤三域微生物高通量绝对定量方法，其特征在于：选用保藏编号为CCTCC NO:M 2017770的大肠杆菌Escherichia coli WYL(E.coli WYL)作为三域通用内标菌株，包括以下步骤：1)、将三域通用内标菌株E.coli WYL，重悬于无菌水中，得OD600nm为0.9～1.0的菌悬液；2)、土壤样品中三域通用内标菌株的添加：吸取200μL步骤1)所得的菌悬液至2g土壤中搅拌混匀；3)、土壤样品DNA提取；4)、样品中三域通用内标菌株绝对定量：采用Spec‑F/R引物对土壤样品中三域通用内标菌株进行定量，反应体系(20μL)为：10μL SYBR Green qPCR SuperMix‑UDG with Rox，正、反向引物各0.4μL，8.2μL无核酸酶水，1μL染色体DNA；反应条件如下：实时荧光定量PCR反应条件![]()
5)土壤样品高通量测序；6)、三域微生物绝对含量计算。
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