[发明专利]一种兰州百合茎尖脱毒与组培快繁方法

摘要

本发明公开了一种兰州百合茎尖脱毒与组培快繁方法，包括以下步骤：S1：选择外观无腐烂症状的兰州百合植株；S2：所述鳞片先用中性洗涤剂流水冲洗20min；S3：将所述灭菌后的鳞片切成6mm×6mm的小块；S4：将所述不定芽切下；S5：所述百合无菌组培苗依次在温度为39℃±1℃，得热处理的组培苗；S6：所述热处理的组培苗作为脱毒材料；S7：剪取2.0cm所述脱毒茎尖茎段；S8：将所述脱毒茎尖转入鳞茎诱导培养基中，30d‑40d后分化出小鳞茎；S9：将所述小鳞茎按10‑18个每瓶的接种量转入增殖培养基中；S10：将所述增殖鳞茎转入生根培养基中；S11：所述鳞茎球放入5℃±0.5℃冷库中。本发明采用酒精与次氯酸钠、升汞配合使用消毒灭菌，可有效控制污染，降低对茎尖组织的影响。

主权项

1.一种兰州百合茎尖脱毒与组培快繁方法，其特征在于：该兰州百合茎尖脱毒与组培快繁方法包括以下步骤：S1：选择外观无腐烂症状的兰州百合植株，以其饱满、无病虫害、无损伤的健康鳞茎做繁殖材料，取中层鳞片作为外植体；S2：所述鳞片先用中性洗涤剂流水冲洗20min，洗净后用自来水冲洗20 min，然后转至超净工作台依次采用质量浓度为10%的次氯酸钠处理5min，无菌水冲洗一次，质量浓度为0.1%的升汞溶液处理8min，无菌水冲洗一次，再转用体积浓度为75%的酒精处理30s后用无菌水冲洗三次，最后用质量浓度为0.2%的升汞溶液处理15min灭菌，无菌水冲洗6‑8次，经消毒滤纸吸干表面水分，即得灭菌后的鳞片；S3：将所述灭菌后的鳞片切成6mm×6mm的小块，按每150mL三角瓶接种8‑15片且内面朝上接入组培苗培养基中，于20℃‑26℃、光照强度为2000Lx‑2500Lx、光照时间为12h的条件下进行培养，25‑35d后即得不定芽；S4：将所述不定芽切下，基部带部分鳞片组织，经继代培养成百合无菌组培苗；S5：所述百合无菌组培苗依次在温度为39℃±1℃、光照强度为2000‑30001x、光照时间为14h培养25‑30d，温度为25℃±1℃、黑暗时间10h的条件下培养20d，即得热处理的组培苗；S6：所述热处理的组培苗作为脱毒材料，剥去0.2mm‑0.5mm的茎尖，按15‑20个每瓶的接种量放入茎尖培养基中，于20℃‑26℃、光照强度为2000‑25001x、光照时间为12h的条件下进行培养，29‑42d后即得脱毒茎尖；S7：剪取2.0cm所述脱毒茎尖茎段，洗衣粉水浸泡5min后用自来水冲洗1h，其次用体积浓度为70%的酒精浸泡30s，再用质量浓度为0.1%的升汞溶液处理12min灭菌，最后无菌水冲洗6次；然后解剖镜下按1.0‑1.5mm、0.8‑1.0mm、0.5‑0.8mm、0.3‑0.5mm、小于0.3 mm切取不同大小茎尖生长点，并分别按30‑35个的接种量接种于脱毒培养基中，于22℃‑28℃、光照强度为2000‑25001x、、光照时间为12‑15d的条件下进行培养，25‑35d后即得脱毒茎尖；S8：将所述脱毒茎尖转入鳞茎诱导培养基中，30d‑40d后分化出小鳞茎；S9：将所述小鳞茎按10‑18个每瓶的接种量转入增殖培养基中，于22‑25℃、光照强度为2000‑25001x、光照时间为15‑22d的条件下进行培养，25‑30d后即得增殖鳞茎；S10：将所述增殖鳞茎转入生根培养基中，于20℃‑26℃、光照强度为2000Lx‑2500Lx、光照时间为12h的条件下进行培养，25‑35d后即得直径为0.5cm‑1cm的鳞茎球；S11：所述鳞茎球放入5℃±0.5℃冷库中，经4周‑6周低温处理后，于‑0.5℃‑0℃冷库中冷藏即可。