[发明专利]RNF213基因完整敲除纯合子斑马鱼的制备方法和用途在审
| 申请号： | 201910592731.2 | 申请日： | 2019-07-03 |
| 公开（公告）号： | CN110396525A | 公开（公告）日： | 2019-11-01 |
| 发明（设计）人： | 盛文利;林晶;杨蜀岚;孙逊沙;温骏;梁杰;张晶晶 | 申请（专利权）人： | 中山大学附属第一医院 |
| 主分类号： | C12N15/89 | 分类号： | C12N15/89;C12Q1/6858;A01K67/027 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 颜希文;宋静娜 |
| 地址： | 510080 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种rnf213a基因完整敲除斑马鱼突变体的制备及其应用；设计针对斑马鱼rnf213a基因的TALEN序列；构建其左右臂质粒，并体外转录出相应的mRNA；将TALEN左右臂mRNA混合并注射到斑马鱼胚胎中；注射后的胚胎养至F0成鱼与野生型成鱼交配，将携带有rnf213a基因突变的胚胎养至F1成鱼；F1代鱼剪尾基因型鉴定发现存在两种杂合子基因型：+2bp及‑7bp；将杂合子与野生型成鱼外交3代，净化其遗传背景后，再将同种基因型的杂合子杂交得到纯合子两种基因型：+2bp及‑7bp。纯合子与纯合子杂交得到的胚胎进行表型观察发现存在与人相似的烟雾病表型及海绵状血管瘤表型。本发明通过TALEN基因编辑技术，能够快速高效的建立rnf213a基因完整敲斑马鱼品系，利用该模型能够开展针对烟雾病或/和海绵状血管瘤的药物筛选工作。 | ||
| 搜索关键词： | 纯合子 成鱼 基因 斑马鱼 基因型 杂合子 表型 海绵状血管瘤 胚胎 烟雾病 野生型 左右臂 敲除 制备 注射 杂交 斑马鱼胚胎 斑马鱼品系 基因型鉴定 转录 基因突变 药物筛选 遗传背景 突变体 交配 并体 构建 剪尾 质粒 发现 净化 携带 观察 应用 | ||
【主权项】：
1.一种rnf213a基因完整敲除纯合子斑马鱼的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、设计针对斑马鱼rnf213a基因2号外显子靶序列的TALEN序列；S2、构建TALEN左、右臂质粒，并分别体外转录出TALEN左、右臂mRNA；S3、将TALEN左、右臂mRNA混合并注射到转基因斑马鱼胚胎中，提取胚胎DNA测序发现TALEN的mRNA能作用于rnf213a基因2号外显子；S4、将注射后的胚胎培养至F0代，并与野生型成鱼交配，获得F1代成鱼；S5、鉴定F1是否存在rnf213a基因突变，并经DNA测序鉴定rnf213a基因突变类型，将含有rnf213a基因突变的杂合子与野生型外交3代，净化其遗传背景；S6、将同种基因型的杂合子杂交得到纯合子两种基因型：+2bp及‑7bp。
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