[发明专利]一种悬浮细胞KBM5高效基因编辑稳定细胞系的建立方法在审
| 申请号： | 201910614553.9 | 申请日： | 2019-07-09 |
| 公开（公告）号： | CN110272875A | 公开（公告）日： | 2019-09-24 |
| 发明（设计）人： | 黄黎珍;邹淑香;汪凯婷;邹芬;陈莹莹;谢水林 | 申请（专利权）人： | 广州华腾生物医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/85;C12N15/90 |
| 代理公司： | 北京科家知识产权代理事务所(普通合伙) 11427 | 代理人： | 陈娟 |
| 地址： | 510000 广东省广州市黄埔区广州*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种悬浮细胞KBM5高效基因编辑稳定细胞系的建立方法，包括以下步骤：(1)构建含靶向KBM5细胞基因的sgRNA的重组表达载体；(2)培养悬浮细胞KBM5；(3)采用电穿孔瞬时转染法将步骤(1)获得的重组表达载体和phCas9质粒共转染步骤(2)获得的KBM5细胞；(4)筛选阳性细胞；(5)筛选单克隆细胞；(6)对单克隆细胞进行鉴定；(7)阳性单克隆细胞扩大培养及冻存。本发明方法通过优化的电转染方案，可使转染效率高于50％，能有效解决悬浮细胞的脂质体转染效率低、病毒转染有致突变性等问题，且具有操作简便、成本低和基因敲除稳定系的效率高等优点。 | ||
| 搜索关键词： | 悬浮细胞 重组表达载体 单克隆细胞 稳定细胞系 高效基因 筛选 阳性单克隆 脂质体转染 病毒转染 基因敲除 瞬时转染 细胞基因 细胞扩大 阳性细胞 有效解决 质粒共转 转染效率 电穿孔 突变性 靶向 电转 冻存 构建 细胞 优化 | ||
【主权项】：
1.一种悬浮细胞KBM5高效基因编辑稳定细胞系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)构建含靶向KBM5细胞基因的sgRNA的重组表达载体；(2)培养悬浮细胞KBM5；(3)采用电穿孔瞬时转染法将步骤(1)获得的重组表达载体和phCas9质粒共转染步骤(2)获得的KBM5细胞；(4)筛选阳性细胞；(5)筛选单克隆细胞；(6)对单克隆细胞进行鉴定；(7)阳性单克隆细胞扩大培养及冻存。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于广州华腾生物医药科技有限公司，未经广州华腾生物医药科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201910614553.9/，转载请声明来源钻瓜专利网。
