[发明专利]一种马尾松胚性细胞增殖的悬浮培养方法

摘要

本发明公开了一种马尾松胚性细胞增殖的悬浮培养方法，包括材料选择、初始接种和悬浮培养工序，将在培养基Ⅰ中培养获得的生长快、活力旺盛的胚性愈伤作为培养材料，然后将在培养基Ⅱ中通过二次振荡培养获取的胚性培养物置于培养基Ⅲ中进行悬浮培养，最后获得马尾松悬浮胚性细胞。本发明详细、系统地对悬浮增殖培养中的材料性状、初始接种量、接种密度、培养周期及培养条件等进行了明确的规定，实现了马尾松胚性愈伤悬浮培养体系的建立，并获取了大量的悬浮培养的胚性细胞系，为今后开展相关马尾松细胞与基因工程方面的研究提供了可靠的资源与技术保障。

主权项

1.一种马尾松胚性细胞增殖的悬浮培养方法，其特征在于：包括材料选择、初始接种和悬浮培养工序，将在培养基Ⅰ中培养获得的生长快、活力旺盛的胚性愈伤作为培养材料，然后将在培养基Ⅱ中通过二次振荡培养获取的胚性培养物置于培养基Ⅲ中进行悬浮培养，最后获得马尾松悬浮胚性细胞；主要操作步骤如下：（1）材料选择：将按常规方法培养获得的马尾松胚性愈伤转入培养基Ⅰ中培养7～10 d，挑选体积增大2倍以上、颜色纯白，且无水渍、褐化的胚性愈伤作为培养材料；（2）初始接种：将2～3 g培养材料转入150 mL广口瓶中，往瓶中加入25 mL培养基Ⅱ，振荡培养10～14 d，然后再往瓶中加入20 mL培养基Ⅱ，继续振荡培养7～10 d，获得胚性培养物；（3）悬浮培养：将广口瓶中胚性培养物全部转入100 mL量筒进行沉积，去掉上清液，取5 mL沉积胚性细胞转入干净的广口瓶中，往瓶中加入40 mL培养基Ⅲ进行振荡培养7～14 d，停止振荡，在瓶中进行胚性细胞的沉积，弃上清液后取3～10 mL沉积胚性细胞和35～42 mL培养基Ⅲ转入干净的广口瓶中，进行胚性细胞的继代增殖悬浮振荡培养，培养周期7～10 d，获得马尾松悬浮胚性细胞。