[发明专利]一种分离矾根复色叶获得纯色无菌苗的方法

摘要

一种分离矾根复色叶获得纯色无菌苗的方法，包括以下步骤：选择外植体并消毒、诱导不定芽、增殖培养和生根培养，获得不同叶色的纯色矾根无菌苗。本发明基于组织培养方法，对矾根复色叶变异材料进行分离和培育，获得不同叶色的矾根无菌苗，解决了矾根复色叶变异材料无法繁殖后代或后代表现不稳定的问题，为矾根新品种培育提供了新途径。

主权项

1.一种分离矾根复色叶获得纯色无菌苗的方法，包括以下步骤：1)选择外植体并消毒取复色矾根叶片，清洗后流水冲洗1‑2小时，先用酒精消毒15‑3秒，再用次氯酸钠消毒8‑12分钟，然后用无菌水冲洗4‑5次，吸干水份待用；2)诱导不定芽剪取复色矾根叶片中不同颜色的叶片块，每个剪口离不同叶色的边界0.2cm以上，叶片正面向上平放于诱导培养基上，先暗培养15‑30d，然后取出置于光照条件下培养，光照时间为12‑16h/d，光照强度为1000‑2000LX，培养温度22‑26℃，培养40‑65d后，外植体切口处形成不定芽；所述诱导培养基包含：MS基本培养基，6‑苄氨基嘌呤0.1‑1.0mg/L，萘乙酸0.05‑0.2mg/L，噻苯隆0.01‑0.1mg/L，蔗糖30‑45g/L，琼脂5‑7g/L，pH 5.8‑6.0；3)增殖培养将获得的不定芽按照不同叶色进行分类，切成单芽，分别培养于增殖培养基，培养30～35天，即可获得单纯色系的矾根丛生芽；其中，所述增殖培养基中包括MS基本培养基、6‑苄氨基嘌呤0.1‑0.4mg/L、吲哚乙酸0.1‑0.2mg/L、蔗糖25‑35g/L和琼脂5‑7g/L，pH 5.8‑6.0；培养条件：24‑26℃，光照时间为12‑16h/d，光照强度为1000‑2000LX；4)生根培养将步骤3)获得的丛生芽切割为单芽，接种至生根培养基，培养25～30天，获得纯色矾根无菌苗；培养条件：24‑26℃，光照时间为12‑16h/d，光照强度为1000‑2000LX。