[发明专利]高亲和力的抗猪CD40试剂设计方法以及相应的抗猪CD40试剂

摘要

本发明提供了一种高亲和力的抗猪CD40试剂设计方法，其包括：S1：在限制性内切酶的作用下获得带有XhoI、BamHI位点的第一段猪CD40L目的基因(基因序列I)；S2：以携带XhoI、BglII酶切位点的p40LBgL以及携带EcoRI酶切位点的P40Eco为PCR模板进行扩增，获得扩增目的基因；在扩增目的基因中，插入表达质粒pwPICZalpha；S3：通过XhoI、EcoRI酶切位点，对扩增目的基因进行酶切，获得带有BglII、EcoRI位点的第二段猪CD40L目的基因(基因序列II)；S4：将基因序列I以及基因序列II进行连接，得到猪CD40L二聚体基因序列；在猪CD40L二聚体基因序列中插入表达质粒pwPICZalpha，得到含有猪CD40L二聚体基因序列的表达载体；S5：将表达载体通过毕赤酵母表达系统进行表达，获得可溶性猪CD40L二聚体。本发明还提供了一种抗猪CD40试剂，其含有上述猪CD40L二聚体。

主权项

1.一种高亲和力的抗猪CD40试剂设计方法，其中，所述抗猪CD40试剂设计方法包括：S1：在猪CD40L基因编码序列的氨基端和羧基端分别插入XhoI和BamHI酶切位点，在限制性内切酶的作用下获得带有XhoI、BamHI位点的第一段猪CD40L目的基因(基因序列I)；S2：以携带XhoI、BglII酶切位点的p40LBgL以及携带EcoRI酶切位点的P40Eco为PCR模板进行扩增，获得扩增目的基因；在所述扩增目的基因中，插入表达质粒pwPICZalpha；S3：通过XhoI、EcoRI酶切位点，对所述扩增目的基因进行酶切，获得带有BglII、EcoRI位点的第二段猪CD40L目的基因(基因序列II)；S4：将带有XhoI、BamHI位点的所述基因序列I以及带有BglII、EcoRI位点的所述基因序列II进行连接，得到猪CD40L二聚体基因序列；在所述猪CD40L二聚体基因序列中插入表达质粒pwPICZalpha，得到含有所述猪CD40L二聚体基因序列的表达载体；S5：将所述表达载体通过毕赤酵母表达系统进行表达，获得可溶性猪CD40L二聚体。