[发明专利]一种从人血液中分离抗体的混合模式层析方法在审
| 申请号： | 201910653498.4 | 申请日： | 2019-07-19 |
| 公开（公告）号： | CN110240649A | 公开（公告）日： | 2019-09-17 |
| 发明（设计）人： | 林东强;褚文宁;姚善泾 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C07K16/06 | 分类号： | C07K16/06;C07K1/16 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 郑海峰 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种从人血液中分离抗体的混合模式层析方法。具体步骤如下：1)预处理，人血液样品，加抗凝剂，离心取上清液，得到血浆；2)层析分离，采用磺胺吡啶为配基的混合模式介质，固定床层析分离血浆，上样pH值6.0～9.0，稀释率0～3.0，洗脱pH值3.0～5.0，收集洗脱峰；3)脱盐和干燥，洗脱收集液脱盐，冷冻干燥，得到纯度大于95％的抗体。本发明的特色在于可以从人血液中直接分离得到高纯度的抗体，方法的关键在于采用了以磺胺吡啶为配基的混合模式层析介质，不用调整血液离子强度和pH条件下吸附抗体，弱酸性条件下洗脱，具有选择性强、洗脱条件温和、抗体收率和纯度高、工艺简单、成本低廉等特点。 | ||
| 搜索关键词： | 混合模式 人血液 抗体 分离抗体 磺胺吡啶 层析 配基 脱盐 洗脱 预处理 弱酸性条件 层析分离 层析介质 分离血浆 固定床层 取上清液 洗脱条件 血液离子 直接分离 高纯度 抗凝剂 收集液 洗脱pH 洗脱峰 上样 收率 吸附 稀释 血浆 | ||
【主权项】：
1.一种从人血液中分离抗体的混合模式层析方法，其特征在于包括如下步骤：1)预处理，含有免疫球蛋白的血液样品，加抗凝剂，离心取上清液，得到上样粗品溶液；2)层析分离，调节上样粗品溶液的pH至6.0～9.0，稀释率为0～3.0，用0.45μm滤膜过滤，上样到填充有以磺胺吡啶为配基的混合模式介质的层析柱中，平衡缓冲液冲洗，洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱峰对应的流出液，得到人抗体溶液；3)脱盐和干燥，将人抗体溶液脱盐，冷冻干燥，得到纯度大于95％的人抗体；所述的混合模式介质为磺胺吡啶作为配基的层析介质；所述的磺胺吡啶为4‑氨基‑N‑(2‑吡啶基)苯磺酰胺或3‑氨基‑N‑吡啶‑3‑甲基苯磺酰胺。所述的平衡缓冲液pH值为6.0～9.0；所述的洗脱缓冲液pH值为3.0～5.0。
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