[发明专利]一种食用菌单倍体的无菌快速分离方法有效
| 申请号： | 201910671247.9 | 申请日： | 2019-07-24 |
| 公开（公告）号： | CN110305800B | 公开（公告）日： | 2023-03-21 |
| 发明（设计）人： | 孔维丽;康源春;崔筱;袁瑞奇;刘芹;孔维威;张玉亭;李惠文;余丰秋;胡素娟;段亚魁;宋志波;韩玉娥 | 申请（专利权）人： | 河南省农业科学院植物营养与资源环境研究所 |
| 主分类号： | C12N1/14 | 分类号： | C12N1/14;C12N1/06;C12R1/645 |
| 代理公司： | 郑州异开专利事务所(普通合伙) 41114 | 代理人： | 韩鹏程 |
| 地址： | 450002 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种食用菌单倍体的无菌快速分离方法，包括以下具体步骤：第一步，将菌丝置于液体培养基中培养得到成熟的菌丝体；第二步，制备染色菌丝液或染色原生质体悬浮液；第三步，确定二倍体和单倍体的分选参数，第四步，分选得到菌丝单倍体或原生质体单倍体。本发明优点在于克服了传统单倍体分选得率低、培育周期长的技术问题，本发明的整个培育过程可实现无菌分离，避免单倍体感染，同时培育周期短，分选得到的单倍体得率高，可直接作为杂交育种的原料，特别适用于平菇、香菇、木耳等二倍体食用菌的单倍体分离，为食用菌新品种的培育打下基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 食用菌 单倍体 无菌 快速 分离 方法 | ||
【主权项】：
1.一种食用菌单倍体的无菌快速分离方法，其特征在于：包括以下具体步骤：第一步，将菌丝置于液体培养基中于25℃培养3～8天，无菌过滤得成熟的菌丝体；第二步，取第一步得到的菌丝体于无菌离心管内，加入研磨珠研磨30～120s；将研磨后的菌丝体进行处理得到染色菌丝液或染色原生质体悬浮液；第三步，将第二步得到的染色菌丝液或染色原生质体悬浮液用流式细胞仪进行倍性分析，找到有效的峰值区域，确定菌丝单倍体或原生质体单倍体的区域间阈值的M值，菌丝二倍体或原生质体二倍体的区域间阈值的M值，菌丝单倍体M值和菌丝二倍体M值的倍数关系或原生质体单倍体M值与原生质体二倍体M值的倍数关系；第四步，按照第三步中确定的菌丝单倍体M值和菌丝二倍体M值调整流式细胞仪的分选参数，利用流式细胞仪对第二步中的染色菌丝液进行分选，收集得到菌丝单倍体；或者按照第三步中确定的原生质体单倍体M值和原生质体二倍体M值调整流式细胞仪的分选参数，利用流式细胞仪对第二步中的染色原生质体悬浮液进行分选，收集得到原生质体单倍体。
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