[发明专利]一种Marc-145全悬浮细胞直接培养猪蓝耳病病毒疫苗的方法在审
| 申请号： | 201910676937.3 | 申请日： | 2019-07-25 |
| 公开（公告）号： | CN110373379A | 公开（公告）日： | 2019-10-25 |
| 发明（设计）人： | 侯野;邵瑞华;马玉鑫;周佳彬;韩丹;宋瑞卿 | 申请（专利权）人： | 北京鼎持生物技术有限公司;珠海鼎安生物制品有限公司;辽宁壹生科生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073;C12N5/02;C12N7/00;C12N7/02;C12N7/06;A61K39/12;A61P31/14 |
| 代理公司： | 北京金宏来专利代理事务所(特殊普通合伙) 11641 | 代理人： | 左海明 |
| 地址： | 100176 北京市大兴区北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及猪蓝耳病病毒疫苗制备领域，特别涉及一种Marc‑145全悬浮细胞直接培养猪蓝耳病病毒疫苗的方法，本发明公开了Marc‑145单层细胞驯化至悬浮培养的方法，实现了Marc‑145细胞在培养基中的全悬浮培养，因而采用猪蓝耳病毒直接接种于Marc‑145悬浮细胞培养，并利用生物反应器扩大培养，培养的猪蓝耳病毒疫苗增殖速度稳定，病毒含量≥108.5TCID50；培养至细胞病变达80％以上时收获病毒液，即得。本发明将猪蓝耳病毒直接接种于Marc‑145悬浮细胞驯化培养，有效增加生产得到的悬浮病毒的稳定性、连续性与安全性，并利用生物反应器放大培养，每0.1ml病毒含量≥108.5TCID50，进一步提高了猪蓝耳病疫苗的质量和产量。 | ||
| 搜索关键词： | 猪蓝耳病病毒 猪蓝耳病毒 全悬浮 生物反应器 疫苗 细胞 接种 悬浮细胞培养 猪蓝耳病疫苗 病毒 单层细胞 放大培养 扩大培养 速度稳定 细胞病变 悬浮病毒 悬浮培养 悬浮细胞 驯化培养 疫苗制备 增加生产 培养基 驯化 病毒液 增殖 收获 | ||
【主权项】：
1.一种Marc‑145全悬浮细胞直接培养猪蓝耳病病毒疫苗的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(a)Marc‑145细胞的驯化培养，所述驯化培养为Marc‑145细胞由贴壁培养驯化为悬浮培养同时将Marc‑145细胞由含血清培养基培养驯化为无血清培养基进行培养；(b)取细胞状态良好并经驯化后Marc‑145悬浮细胞经摇瓶进行扩大培养，待细胞状态稳定，生长良好后接种于2L～8L的生物反应器中进行预培养，随后根据细胞状态，生长情况，逐步放大培养直至终级反应器；(c)待终级反应器细胞密度达到8.0×106.0～10.0×106.0个/ml，同时细胞状态稳定，调整反应器细胞密度，使其达到4.0×106.0～5.0×106.0个/ml，按MOI 0.1～1.0接种猪蓝耳病毒至Marc‑145悬浮细胞中，猪蓝耳病毒的含量为每0.1ml病毒含量≥108.5TCID50，培养至细胞病变达80％以上时收获病毒液；(d)将收获的病毒液进行纯化、灭活后得灭活疫苗。
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